临床微生物检验标本的采集、运送及接种要点.ppt

支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。 小儿取痰法　 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。 注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。 三、标本运送 常温2h内送检实验室。因时间延长可能引起革兰氏阴性菌的过度繁殖，嗜血杆菌和肺炎链球菌的死亡。 注： 鳞状上皮细胞细胞10个/低倍视野、白细胞25/低倍视野为合格的痰标本特别是有细菌被白细胞吞噬的现象时更有临床意义； 第六节 粪便 用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。 外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。 液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。 如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。 一、标本采集 粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的提倡使用运送培养基。 消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等部位各一块胃黏膜活检标本，置入无菌生理盐水中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4℃保存，24h内送检。 第七节 尿液 力争在使用抗生素之前，注意避免消毒剂污染标本。 清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本；嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后按尿标本采集消毒程序消毒后，开始排尿，将前段尿排去，留取中段尿。 耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液。 直接导尿：按尿标本采集消毒程序消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取尿液。 留置导尿管收集尿液：利用留置管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液。注意不能从尿液收集袋中采集尿液。 一、标本采集 采集容器的要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏、广口、容积应 50 ml、盒盖易于开启，不含防腐剂和抑菌剂。 标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4℃冷藏保存时间不得超过8小时。但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。 第八节 生殖道标本 一、标本采集 采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻转拭子采集。 阴道分泌物采集时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹隆后部，宫颈2～3cm处，转动并停留10～30s取分泌物。 淋球菌培养需保温及时送检，衣原体、支原体等培养无法及时送检时应4℃保存。 第九节 厌氧培养标本的采集 最好以针筒直接由病灶处抽取标本，一般情况下应从无正常菌群寄居的部位采取标本 一、 标本采集与运送 不宜做厌氧菌培养 ①鼻咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管抽取物；④胃和肠道内容物、肛拭；⑤接近皮肤和黏膜的分泌物；⑥褥疮溃疡及黏膜层表面；⑦排出的尿或导尿；⑧阴道或子宫拭子；⑨前列腺分泌物。 经皮肤黏膜组织采集标本时，皮肤表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。 采取标本时应尽量避免接触空气，多使用针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。 平板接种（分区划线法） 斜面接种法 穿刺培养法 液体培养基接种法 细菌接种技术 用于标本的分离培养，通常采用四区划线法(尿液、留置管除外) 1、操作者坐在微型加热器前，右手持接种环将圈环至少烧红两次，再接触标本或菌种。 2、左手正持平板（盖上底下），轻轻将平板盖打开少许，将接种环涂于平板的1/4区域，将接种环烧红，待冷却后接触第一区边缘4-5次，再涂划平板的另外1/4区域（第二划线区），以同样的方式进行第三区及第四区的涂划。也可反持平板（底上盖下）的底部迅速涂划各区。 3、尿液标本定量加入后，垂直划线即可。 4、导管标本直接放到血平板上用接种环滚动4次即可。 5、涂划完毕后，平板合盖，标明标本的编号、标本种类、病人姓名和送检时间，再倒置(盖下底上)于CO2培养箱(粪便除外)培养。 6、接种完毕后，接种环必须再通过火焰烧红一次，作为灭菌。 分区划线法 用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特征和动力。 1、用左手握住斜面培养管底部，右手持接种针（环）。 2、用右手小指与手掌拔出管的塞子，将管口通过火焰灭菌。 3、用烧红过的接种针挑取菌落。 4、将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基中下部（不要到底部），然后沿原穿刺线退出接种针。 5、伸入到斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上地呈“Z”