实验一病理组织切片制作技术2011.ppt

《兽医病理解剖学》实验 实验内容 实验一 病理组织切片制作技术 实验二 局部血液循环障碍：充血、 淤血、缺血、梗死、出血 实验三 局部血液循环障碍 血栓、 水肿 实验四 组织细胞的变性 实验五 组织细胞坏死 实验六 组织细胞病理性物质沉着 及组织修复 实验七 炎症 实验八 肿瘤 实验九 心脏血管系统病理 实验十 呼吸系统病理 实验十一 消化系统病理 实验十二 泌尿系统病理 实验十三 中枢神经系统病理 前言 《兽医病理解剖学》实验部分在本课程教学中占有特殊地位。学生通过观察肉眼和切片标本印证课堂所讲的理论，加强理解，取得感性知识的教学环节。在学习过程中，要求同学初步掌握观察和描述器官组织病变的方法和认识病变。 实验一 病理组织切片制作技术 目的要求： 1、重点掌握病理组织切片的基本制作过程步骤。 2、了解病理组织切片制作过程中的注意事项。 实验内容 掌握组织材料的取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色及封固的基本操作。 一、取材及固定 （一）取材注意事项： 1、材料新鲜 2、组织块力求小而薄 3、勿使组织块受挤压 4、尽量保持组织的原有形态 5、熟悉取材部位 （一）取材注意事项： 6、选好组织块的切面 7、保持材料的清洁 8、切除不需要的部位 （二）固定及目的： 应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生活状态的过程称为固定。 固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛溶液），固定24小时以上。 固定的目的 1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。 2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。 4、使组织块硬化，便于制作薄片。 固定的注意事项 1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于15×15mm。 2、固定液与组织块的比例应大于10：1。 3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固定后再修整成小块，重新投入新配制的固定液中继续固定。 4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防固定组织变形。 二、固定后处理及切片 (一)、洗涤与修切 (二)、脱水与透明 脱水：将组织块内水分置换的过程。 透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须适度 。 50%乙醇: 30-60min 70%乙醇: 1-2小时或过夜 80%乙醇: 1-2小时 95%乙醇: 1-1.5小时 100%乙醇: 30min 100%乙醇: 20min 1：1无水乙醇：二甲苯: 20min 二甲苯: 10-30min (三)、浸蜡与包埋 52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在60℃的温箱中进行。 1：1二甲苯：石蜡: 30min 石蜡Ⅰ: 30min 石蜡Ⅱ: 30min 石蜡Ⅲ: 30min （四）切片、粘片 1、切片前处理及切片 2、载玻片处理 3、粘片（展片） 4、烤片 三、脱蜡和染色 （一）、脱蜡 1、二甲苯Ⅰ: 5-10min 2、二甲苯Ⅱ: 5-10min 3、1：1二甲苯：乙醇（冬20min）: 5min 4、无水乙醇、95%、80%、70% 、50%梯度乙醇每级1-2min 5、蒸馏水1-2min （二）、染色（HE染色法） 1、苏木素染液: 5～15min 2、蒸馏水（洗去多余的染液）: 30s 3、分色:1%盐酸-70 %乙醇分色: 1-30s 4、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）: 15-20min 5、蒸馏水（洗去多余的碱） : 1-2min 6、逐级入50%、70%、85%乙醇，: 每级1-2min 7、伊红- 95%乙醇染液: 15s～2min 8 、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级 脱水，每级1-2min 9、1：1无水乙醇：二甲苯 : 5min 10、二甲苯 Ⅰ ：5min 11、二甲苯Ⅱ ：5min 四、封固 滴加中性树胶，加盖玻片封片。 五、光镜观察 主讲：徐镔蕊 教授 * * * 实验内容 实验内容 生物组织脱水机 组织包埋机 轮转式组织切片机 组织切片染色机