QExactive串联超高分辨质谱在代谢物分析中的优势.ppt

* Q-Exactive串联超高分辨质谱在代谢物定量分析中的优势-生物基质中利巴韦林活性代谢物的定量测定 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（背景） 利巴韦林（RBV）是一种合成的核苷类抗病毒药，主要用于治疗慢性丙肝病毒感染。 作为一种前药，利巴韦林是通过其三磷酸盐代谢物（RTP）在体内发挥生物学作用的。 为了系统详细地研究RBV生物体内的作用机理，必须建立一套准确的、灵敏的、专一的LC/MS/MS方法测定其活性代谢物RTP。 生物体内的内源性尿嘧啶核苷（uridine）及其三磷酸盐代谢物（UTP）与RBV和RTP结构非常类似、分子量极其相近（小数点后第二位才有差异），对生物样品的分析形成很大的干扰。 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（背景） RBV 利巴韦林 [M-H]-at m/z 243.07349 C8H11N4O5 Uridine 内源性干扰物 [M-H]-at m/z 243.06226 C9H11N2O6 UTP 内源性干扰物 [M-H]-at m/z 482.96125 C9H14N2O15P3 RTP 目标化合物 [M-H]-at m/z 482.97248 C8H14N4O14P3 代谢产物 代谢产物 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（文献） M1 vs M2 M1 exact mass M2 exact mass Δm (Da or ppm) FWHM (Da or ppm) Resolved? R=50K R=100K R=50K R=100K RBV vs uridine 243.07349 243.06226 0.01123 or 46 0.00486 or 20 0.00243 or 10 Yes Yes RMP vs UMP 323.03982 323.02859 0.01123 or 34 0.00646or 20 0.00323 or 10 No Yes RDP vs UDP 403.00615 402.99492 0.01123 or 27 0.00806or 20 0.00403 or 10 No Yes RTP vs UTP 482.97248 482.96125 0.01123 or 23 0.00966 or 20 0.00483 or 10 No Yes Δm ≥ 2 × FWHM 两化合物可以达到基线分离。 分辨率=10,0000, RTP与基质内源干扰物基线分离 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（理论计算） 分辨率：70,000 分辨率：140,000 不同分辨率下理论的RTP和UTP分离的质谱图 UTP UTP RTP RTP 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（不同分辨下率质谱图） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical 不同分辨率下生物基质中RTP和UTP分离的质谱图 分辨率：17,500 分辨率：35,000 分辨率：70,000 分辨率：140,000 质量偏差均1ppm UTP RTP 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（空白基质图） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical 不同分辨率下空白基质中RTP与UTP的分离色谱图 UTP RTP 分辨率：70,000 分辨率：140,000 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（峰面积与分辨率） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical 保证高分辨的情况下，快速的扫描能保证较好的灵敏度， 分辨率：70,000 分辨率：140,000 生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（基质样品） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical 140,000分辨率下空白基质和基质加标的色谱图比较 RTP UTP 基质空白 基质空白加标 超高分辨率有效消除了生物基质中内源物质干扰 实例-生物基质中三磷酸利巴韦林定量检测（RSD%） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical 同一浓度（1ppm）的RTP连续进样8针，计算RSD值为7% 实例-生物基质中三磷酸利巴韦林测定（检测下限） Co-work with Wuxi Apptec DMPK/Bioanalytical LOD=25ng/mL in liver homogenous RTP IS UTP