第一章实验室及基本操作2014x.ppt

污染外植体的挽救措施 再次使用消毒剂处理； 无菌水充分洗涤后，接种到加了抗生素的培养基中； 无菌水充分洗涤后，接种到加了杀菌剂的培养基中。 (培福朗、苯来特、特克多处理夏橙成年树枝条) 6. 无菌操作 在无菌操作前30min先使超净工作台处于工作状态，同时开启紫外灯。 关掉紫外灯10min后即可进入接种室； 进入接种室前用肥皂洗净双手， 穿戴好工作衣帽后进入接种室， 用70％酒精擦拭双手和台面。 操作期间也应再擦拭数次。 将材料放入广口瓶（灭菌小烧杯）进行消毒。 消毒完毕，将材料放置于无菌培养皿中， 用灼烧过的器械切取适当的外植体。 外植体植入培养基。 三、环境条件的调控 1. 光照 光照时间：16/8h 光照强度 2. 温度：昼夜温差28/18℃。 3. 湿度： 环境相对湿度70-80%。 4. 通气：封口膜 * 2）细胞分裂素类 促进细胞分化； 有利于细胞分裂和愈伤组织的形成； 促进细胞分裂与扩大，可使茎增粗，而抑制茎的伸长； 诱导芽的分化，促进侧芽发生。 ◆激动素：最主要的用途是诱导芽的形成。 ◆玉米素：是一种天然激素，价格昂贵，其作用稍差于苄氨基嘌呤。 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）：具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点， 是组织培养最常用细胞分裂素类。 主要作用是促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生。 作用效力 玉米素 ZT 6-苄氨基腺嘌呤 6-BA 激动素 KT 腺嘌呤 3）赤霉素 赤霉素有127种， 生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同， 培养基中添加的是GA3， 主要用于促进幼苗茎的伸长生长， 促进胚状体发育成小植株。 5. 培养材料的支持物 琼脂 固体培养时琼脂是最好的固化剂。 琼脂的用量在0.8-1.0%之间 。 凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外， 还与高压灭菌时的温度、时间和pH值等因素有关。 其它：玻璃纤维、滤纸桥、海绵、卡拉胶等。 6、其他成分 抗生素物质：有青霉素、链霉素、庆大霉素等, 可防止菌类污染，减少培养中材料的损失。 抗氧化剂：易褐化的材料。 活性炭： 茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死性褐化物； 新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长； 活性炭在生根时有明显的促进作用。 7、pH值 喜光、耐旱、耐盐碱： pH值中性； 喜湿、耐阴、喜酸： pH值偏酸。 培养基灭菌后， pH值一般下降。 （四）培养基的选择 几种基本培养基的特点 1）富集元素平衡培养基 --- MS培养基（典型代表） 无机盐浓度高，元素间的比例较适合； 缓冲性能好，某些元素略有损失不会影响离子平衡； 营养丰富，不需再加入水解蛋白等有机成分； 微量元素种类较全，浓度较高； 适合多种植物，用途广泛。 与MS相类似的培养基， LS、BL、BM、ER培养基等。 2）硝酸钾含量较高的培养基 硝酸钾的含量高， 铵态氮的含量低， 含有较高的盐酸硫胺素（VB1）。 如，B5（水稻成熟胚愈伤组织分化时用其微量元素部分）、 N6（禾谷类植物的花药和花粉培养 ）、 SH培养基。 3）中等无机盐含量的培养基 大量元素无机盐约为MS的一半； 微量元索种类减少而含量增高； 维生素种类比 MS多。 如，H、Nitsch、Miller培养基。4）低无机盐培养基 无机盐含量很低，一般为MS的1/4； 有机成分含量也很低； 多用作生根培养基。 如，White 、WS、HE、HB培养基。 2. 培养基选择 1）背景调查 对该供试植物 分类地位、生理特性、繁殖、栽培条件及品种类型等 有充分的了解。 应详细查阅前人对该植物的研究工作， 总结分析前人工作的成功和不足之处， 从而在此基础上确定基本培养基类型。 2）选择原则 同一物种的不同亚种、品种间的基本培养基类型基本相同； 同一植物的不同组织、器官的基本培养基类型基本相同； 营养成分需求与田间栽培有相似性； 无机盐浓度是基本培养基类型的重要因素， 应该作为培养基选择的重