紫外线对枯草芽孢的诱变作用课件.ppt

基本原理 当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。 在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度-菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的菌数。 光电比浊计数法 光电比浊计数法优缺点 优点：简便、快速、连续测定、适合自动化。 缺点： 测定的结果是微生物总量，不能区分活菌和死菌； 光密度受细胞大小、形态、培养液成分以及选用的波长的影响； 对于不同微生物的菌悬液要选择相应的菌株和培养条件制作标准曲线； 对于颜色太深的样品或含其它具有吸光值的物质不能用此法。 721型分光光度计操作方法 接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10至15分钟。 将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）。根据所需波长转动波长选择钮。 将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。 在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向T=0处。 盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的T=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。 比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。 平板培养计数法 基本原理 平板培养计数是根据微生物在高度稀释条件下，其在固体培养基上所形成的单个菌落是由一个细菌繁殖而成，即一个菌落代表一个细菌。计数时，首先将待测样品进行系列稀释，尽量使样品中的细菌分散开，使成单个存在(否则一个菌落就不只代表一个细菌)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由一个细菌生长繁殖形成单个菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的菌数。 有平板倾注培养法和平板涂布培养法两种。 平板涂布培养法计算： 每ml菌液中的菌数＝同一稀释度几次重复的菌落平均数×接种量（ml）×稀释倍数/1ml 注意事项 1、 用平板培养计数法测定细菌时，待测菌稀释度的选择应根据样品而定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定标本细菌菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度。 2、所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。 五、实验报告内容 题目 班级 组别 组员 一．? 实验目的 二．? 实验原理 三．? 实验器材 四．? 实验步骤 五．? 实验结果 六．? 讨论与实验心得 七．? ?思考题 安全注意事项一 1、 紫外灯打开时，不要操作，不要长时间直视紫外灯，以免灼伤皮肤和眼睛。 2、 涂平板时，涂布棒从酒精中提起，先放杯边刮去多余酒精再过火焰，灼热的玻棒切勿再放入烧杯以免点燃烧杯中酒精。如果操作不慎，快速盖灭烧杯里的明火。不要向燃烧的酒精泼水。不要将燃烧的酒精倒进水槽中。 安全注意事项二 3、有酒精的玻棒不要竖起来拿着，这样酒精会流到手 上，避免烧伤。 4、玻棒点燃后即离开酒精灯火焰，待玻棒冷却，轻轻放在琼脂表面，再充分冷却。 5、有酒精的烧杯应放在远离酒精灯的地方，小心酒精灯的火焰。 6、废弃菌液不能直接倒入水槽，要集中灭菌后才能倒掉。 思考题 1、用于诱变的菌液为什么要在磁力搅拌下进行？ 2、经紫外线处理后的操作和培养为什么要在暗处 或者红灯下进行？ 3、如何进行梯度稀释，要得到10-8 终稀释度，应 怎样操作? 4、分光光度计数法检测细菌数量的优点和缺点是什么？ 林冠峰 jesselyn@163.com 教学科研实验中心 一、实验目的 1、掌握紫外线诱变育种的原理和实验方法 2、观察紫外线对枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的 诱变效应 二、实验原理 微生物诱变育种，指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体细胞，促进其突变率显著提高，从中筛选出产量高、性状优良的突变株。 主要分成： 物理诱变、化学诱变 主要环节： 诱变（随机） 筛选（定向） 紫外线为主、首先考虑采用 快中子、60Co、γ射线和高能电子流β-射线等受设备条件限制 应用历史悠久：工业微生物菌种的诱变处理 高单位抗生素产生菌种中，有80%左右是通过紫外线诱变后经筛选而获得的。  物理诱变 诱变机理 紫外线的波长：200~380 nm ， 诱变最有效的波长：253~265 nm， 紫外线杀菌灯所发射的紫外线有80%是254 nm。 生物学效应：引起DNA 结构变化，如DNA 链的断裂、碱基破坏。 最主要作用：