一种简单可靠的两栖类染色体分带技术1).pdf

．渔f-}-HEREDITAS(Beijing)11(5):38-3919R9 实与 脸 小 ．杜， 刀 从 一种简单可靠的两栖类染色体分带技术” 术法 温 昌 样 安（徽省蚌埠医学院生物教研室） ＿甘ElXx4、金线蛙、中华KNMmNgA#9，建立瑙勋嘟热酥姗狱一 恻U-Giemsa分带技术。其特点是不同时期的染色体带纹的数目有所不同。早中期染色体带纹数目较 竺携史严带纹数目较少，中中期带纹数目适中。但同一时期染色体带纹数目是相同的，故仍能够进行 稍确的分析。 关健词：两栖类，染色休，BrdU-Giemsa分带技术 两栖类染色体的研究，70年代前主要是应 FdU混合液用0.9%NaCl溶液配制），注射量 用常规染色技术。70年代后开始应用分带技 可根据动物的大小而定，一般为0.3-0.5ml, 术，这对阐明和探讨两栖袋染色体的结构和功 同时注射0.3 的秋水仙素，注射量一般为 能起着重要作用，但是这些分带技术都只能显 0.2-0.4ml。如果不取骨髓细胞制片可不注射 示异染色质和核仁组织者 N（ORs)。如：C带、 秋水仙素。 荧光C带、Ag带、氮芥唆叮因染色、DAPI染 二（）培养 24小时后从心脏取血进行 色、远端霉素A和 DAPI联合染色、光辉霉素染 细胞培养。取血时针头必需准确插人心卖部 色等。对常染色质，应用一般分带技术均不能 分，一次成功，不然容易污染，导致培养失败。培 显示出带型来。原因主要是两栖类染色体DNA 养液成分为：MEM或RPM116402.4ml,0.5外 含量比较高，螺旋化程度高，比较紧密，使带与 水解乳蛋白溶液 1.6rnl，小牛血清 1m1,PHA 带之间的距离太小，以致不能用光学显微镜分 0.25ml，双抗 （青霉素、链霉素）各 100单位．／毫 辨。由于很难在两栖类染色体上显示出复合带 升。培养72小时收获细胞。终止培养前15小 型 指（G带、Q带,R带），因此对准确鉴别染色 时加秋水仙素溶液，浓度为。.1外，6号半针头 体，判断染色体的结构重排，研究染色体的进化 每培养瓶加一摘。常规空气干燥法制片，制片 带来很大困难。1981年Schempp和SchmidE93 可在酒精灯上过火。从心脏取血进行血培养后， 首先将 BrdU-Hoechst-Giemsa技术应用于两 再取骨髓细胞。常规骨髓s少法制片和血培养 栖类染色休并获得了成功。这是第一次在两栖 一样可以在酒精灯上过火。 类染色体上显示出可重复的复合带型。1983年 三（）染色 无论是骨髓制片或血培养 温昌祥等11〔，应用此技术于中华大蟾赊，同样得 制片都要在自然干燥后立即染色，不需老化。染 到满意的结果。1983年尚克刚等‘,1984年邓 色用5%的一Giemsa直接染色13-15一分钟 崇新等,1985年张任培等h]又将此技术应用于 (P.B.S．稀释 Giemsa染液，P.B.S．的pH 无尾类的淋巴细胞培养也得到了很好的效果。 为7.0)。不需经过任何预处理，用Giemsa一 本文介绍一种简便的两栖类染色体分带、技术。 步染色就可得到清晰的带型 见（图版 1)0 操 作 步 骤 WenChongxiong:ASimpleand ReliableBand- 一（）荆t 给蛙类实验动物腹腔注射 ingTechniqueinAmphibiaChromosomes 1）本文经复且大学遗传所刘祖洞教授审阅，特致谢意。 0.5多BrdU和 0.025务FdU混合液 (BrdU/ 本文于1988年6月24日收到。 以上 表（ 1)0 结 果 和 讨 论 2．本方法可以单独作骨髓细胞的染色体分 1．用黑斑蛙 R（ananigromaculata)、金 带或淋