- 1、本文档共11页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
基干大鼠室性早搏心脏毒性附子质量生物评价方法研究
基于大鼠室性早搏心脏毒性的附子质量生物评价方法研究 [摘要]附子是确有疗效的毒剧类中药,构建关联临床毒副反应的质量评价方法对提高其炮制减毒质控水平和保障临床安全性具有重要意义。该文针对附子可导致室性早搏这一早期心脏中毒反应,构建基于大鼠室性早搏(premature ventricular contractions,PVC)最小中毒量(minimal toxic dose,MTD)测定的附子炮制品质量生物评价方法,通过影响因素考察优化方法学(动物性别、体重、对照品稳定性与供试品稳定性),检测结果的重现性符合药品质量生物评价要求。应用该方法检测生附子及其不同炮制品黑顺片、白附片、蒸附片、刨附片、炮天雄致大鼠室性早搏MTD,结果表明,生附子炮制后MTD均显著升高(P [Key words]Fuzi; biological assessment; cardiac toxicity; premature ventricular contractions (PVC); minimal toxic dose; quality control
doi:10.4268/cjcm
附子是确有疗效的毒性中药。以参附注射液、四逆汤为代表的附子制剂,对于各种急、慢性心衰均具有显著疗效,奠定了附子在中医临床的特殊地位。然而,近十多年来,东亚地区几乎每年都有附子中毒的不良反应报道;究其原因,多与饮片质量密切相关[1-2]。通过文献和临床实际调查,发现附子及其炮制品导致的不良反应,除极个别特殊病例发生死亡,绝大部分都是饮片质量波动引起心律失常为主的心脏毒性[3]。附子的毒性成分主要是乌头碱类物质,具有强烈的心脏毒性。附子炮制后可显著降解剧毒的乌头碱类成分,起到炮制减毒的效果,保障临床应用安全性。文献研究表明,乌头碱中毒后,在哺乳动物心电图上依次表现为室性早搏、室性心动过速、心室纤颤、心室扑动以及停搏[4-5],其中室性早搏是乌头碱和附子心脏毒性最早期的中毒标志。然而,目前尚缺乏针对这一早期心脏中毒反应的评价方法。因此,测定附子引起大鼠室性早搏的最小中毒量(MTD),可作为附子炮制品减毒程度和质量评价的重要参考指标。本文探索建立基于室性早搏MTD测定的附子炮制品质量生物评价方法,通过对测定方法学的研究,明确了相关的影响因素;以此为基础,评价了生附片、黑顺片、白附片、蒸附片、炮天雄、刨附片的生物毒性,为附子的质量评价与临床应用提供了新的思路与方法
1 材料
1.1 药物
黑顺片、炮天雄、蒸附片、刨附片、白附片于2014年10月采购于四川江油中坝附子科技有限公司。经中国人民解放军第三?二医院肖小河研究员鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工炮制品
1.2 试剂
乌头碱对照品购于成都克洛玛生物科技有限公司,批号150322;二氯甲烷,乙酸乙酯,异丙醇,乙酸铵,浓氨,乙醇均为分析纯,购于北京化工厂;去离子水(自制);乙腈(色谱纯,Fisher);氯化钠注射液购于石家庄四药有限公司,批乌来糖(氨基甲酸乙酯)购于国药集团化学试剂有限公司,批号N 1.3 仪器
RM6240BD型多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂);BYZ-810T注射泵(长沙比扬医疗器械有限公司);Agilent 1200型高效液相色谱仪(四元泵,自动进样器及UV检测器);Gradient A10 Mill-Q 超纯水器(法国 Millipore 公司);Sartorius-BS110S千分之一分析天平、1/10万分析天平(德国赛多利斯公司);台式冻干机(北京博医康实验仪器有限公司);超声波清洗仪(上海声彦超声波仪器有限公司)
1.4 动物
SD大鼠,SPF级,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供,动物许可证号SCXK-(军)2007-004
2 方法与结果
2.1 测定方法与评价指标
2.1.1 心电图的测定 大鼠用20%乌来糖溶液(8 mLkg-1)麻醉,背位固定,连接电极用多道生理信号采集处理系统测定二导联心电图,描记正常心电图。注射器与头皮针相连,一端固定于微量注射泵上,另一端接于大鼠尾静脉中,以2 mLh-1恒速推注乌头碱溶液或附子炮制品提取液,观察并记录心电图的变化,直至出现心室早搏(PVC)的变化,即首次出现QRS波倒置及变宽,记录此时的推注体积。体积越小,样品毒性越强。大鼠正常心电图与室性早搏的心电图见图1
2.1.2 对照品溶液的制备[6] 精密称取乌头碱对照品适量于棕色量瓶中,加无水乙醇超声并定容,配制质量浓度为200 mgL-1 的对照品母液。取0.5 mL于20 mL离心管量瓶中
文档评论(0)