免疫胶体金剖析.pptx

免疫胶体金技术的研究进展 汇报人：詹积 学 号：6160109017 专 业：营养与食品卫生学 免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。 胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。 胶体金技术相关定义 04 03 02 01 发展历程 制备方法 种类及优点 技术展望 目录 CONTENTS 胶体金技术的发展 01 Development of Immune colloidal gold technique 1939 （雏形） 1971 （免疫组织化学研究） 1974 （间接免疫金染色法） 1978 （胶体金标记法） 1983 （免疫金银染色技术） Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。 Geoghegan 等应用免疫胶体金染色技术在光镜水平检测 B 淋巴细胞表面膜免疫球蛋白。 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度。 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法 Holgatet 等在胶体金染色的基础上，增加了银显影技术，免疫金银染色技术取代了传统的荧光素和酶等物质。 发展历程 胶体金的制备 02 是氯金酸 (chloroaurie acid，HAuCl4 ) 在还原剂( 白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等 ) 作用下，聚合成带负电的疏 水胶溶液。 胶体金概念 胶体以金颗粒为核，表面吸附AuCl4-和H+双层离子，与蛋白质分子及其它非共价的生物大分子 ( 毒素、酶、抗生素、激素、多肽等 ) 正电荷基团形成静电结合，且不影响其生物特性。 胶体金颗粒带电情况 在适宜条件下，抗原和抗体与胶体金颗粒反应产生聚集，达到一定的密度时，大量聚集的标记物显示出肉眼可见的红色或粉红色斑点。 抗体和金颗粒的耦联 胶体金基本原理 基本原理：在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子。在适当条件下，还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒，形成金溶胶。 Add 100 mL of 1.0 % HAuCl4 to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate. Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil. To the boiling solution, add 1.5 mL of a 1% solution of trisodium citrate dihydrate, Na3C6H5O7 · 2H2O Stop heating when a deep red color is obtained. 胶体金的制备——化学还原法 胶体金技术的种类及特点 03 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。 免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过程中被分析物 与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。 免疫胶体金快速诊断技术 免疫层析法 ( immunochromatogra-phy，ICA) 快速免疫金渗滤法 (immuogold filtration assay ，IGFA) A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒 最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。 技术优点： 1. 胶体金制备简单 2. 标记简单，检测快速 3. 特异性强 4. 敏感性高 5. 定位准确 6. 适应性广 7. 易于双重和多重标记 技术不足： 胶体金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂的同一性。因此胶体金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。 免疫胶体金技术的特点 免疫胶体金技术的展望 04 免疫胶体金技术展望 提高灵敏度、检测范围 提高检测灵敏度的关键是对捕获信号进行放大。 结合相应的生物传感器和电化学设备等，对靶信号染