人纤溶酶活性动态显色检测方法的建立及验证.pdf

74 · 中国生物制品学杂志2017年 1月第 3O卷第 l期 ChinJBiologicalsJanuary2017，Vo1．30No．1 技术方法 人纤溶酶活性动态显色检测方法的建立及验证 岳胜兰，周志军，彭焱，林连珍，李陶敬，邢延涛，汪菲菲，李策生，胡勇 武汉生物制品研究所有限责任公司血液制剂研究室，湖北 武汉 430207 摘要： 目的 建立人纤溶酶 (plasmin，Plm)活性的动态显色检测方法，并进行验证。方法 用微量滴定板作为载体，将 不同活性浓度的Plm(1．0、0．5、0．25、0．125、0．0625、0．03125IU／m1)分别与不同浓度的发色底物S-2251(2．0、 1．0、0．66、0．33mg／m1)~g匀，连续监测 10min，测定反应体系吸光值变化率 (△A／min)，确定方法的反应参数。同 时对方法的选择性、线性范围、定量下限、准确度、精密性、特异性及稳定性进行验证。采用建立的方法检测 Plm纯 化样品。结果 确定定量上限为0．6IU／ml，底物浓度为0．66mg／ml；监测5min时校正标样及质控样品回收率 为92．0％ 111．8％，定量下限样品回收率为96．5％～118．0％。注射用水、稀释液、尿激酶(Urokinase，UK)、6一氨基 己酸(6-Aminoeaproicacid，EACA)、人纤溶酶原(plasminogen，Plg)等组分的响应低于定量下限响应的8．22％，并低于 内标响应的0．86％，表明该方法具有 良好的选择性 ；线性范围为0．05—0．6IU／ml，校正标样回收率在96．8％～ 111．2％之间，R。≥0．99；定量下限为0．05IU／ml，定量下限处准确度在 l15．2％～116．2％之间，CV≤5．0％；高、 中、低浓度质控样品检测结果准确度在 102．3％～111．8％之间；批内cv值 ≤7．7％，批间cv值 ≤5．2％；0．5txg／ml UK对Plm活性检测无影响，EACA浓度在 0．05—0．2otol／L之间及 Plg浓度低于O．3mg／ml时对Plm活性检测 结果无影响；Phn质控样品复溶后在室温及 2～8℃放置 Ih不影响检测结果。Plm纯化样品活性回收率为91．84％。 结论 本方法具有 良好的准确度 、精密度 、特异性及稳定性 ，可用于工艺样品中Plm活性的检测。 关键词：人纤溶酶；动态显色法；酶活性 中图分类号：R392—33 文献标识码：A 文章编号 ：1004—5503(2017)01—0074—05 Developmentandverificationofdynamicchromogenicmethod fordetermination ofhumanplasminactivity YUESheng—lan，ZHOUZhi-jun，PENGYan，LINLian—zhen，LITao-jing， XING Yan—tao，WANG Fei—fei，LICe—sheng，HU Yong WuhanInstituteofBiologicalProductsCo．，Ltd．，Wuhan43020~HubeiProvince，China Correspondingauthor：YUESheng-lan，E—mail：yueshenglan@126．com Abstract：0bjectiveTodevelopandverifyadynamicchromogenicmethodfordeterminationofhumanplasmin(Plm) activity．MethodsUsingmierotiterplateasacarrier．thechromogenicsubstrateS一2251atvariousconcentrations(2．0． 1．0，