基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证.pdf

热带作物学报 2017，38(3)：513—520 ChineseJournalofTropicalCrops 基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育 及其分子特征验证 黄 静 1,2,3，贾瑞宗孙，孔 华2 郭静远 ，王绪朋 1,2，郭安平 。 1海南大学农学院，海南海口 570228 2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 ．海南海口 571101 3海南医学院基础医学与生命科学学院．海南海 口 571199 摘 要 根据 RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒 (PRSV)植物表达载体 pCAMBIA2300—35S—CP—RNAi—OCS． 通过基 因枪法将载 导入番木瓜 的愈伤组织 中，经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株 。描述转化植株的分子 特征 同时进行抗病毒试验分析其抗病性 。实验结果显示 ：转基 因株系 474为单拷贝插入 的杂合子 ．插入位点在 第 7号染色体 supercontig_61的717141位置 ；抗病毒试验 中，在接种病毒后 28d内非转基 因株系 1280有高浓 度 的病毒积累并很快表现 出明显 的病症 ，而转基 因株系 474基本无病毒积累且无发病症状。表 明转基因株系 474具有较好 的PRSV抗性，有待于进一步 田间试验 。 关键词 番木瓜环斑病毒 ：番木瓜 ：RNAi 中图分类号 S188 文献标识码 A Breedingand Molecular Characteristi0n ofRNAiPapaya for Resistance ofPapayaRingspotVirus HUANG Jing ，JIA Ruizong ，KONG Hua，GUO Jingyuan， WANG Xupeng ．GUO Anping 1CollegeofAgricuhure，HainanUniversity,Haikou，Hainan570228,China 2Instituteof TropicalBioscienceandBiotechnology,ChineseAcademyof TropicalAgricuhuralSciences Haikou，Hainan 571101，China 3SchoolofBosicandLfieScience，Hainna Medical University,Haikou，Hainna 571199,China Abstract RNAi-mediated virus resistance strategy wasused to develop PRSV resistance papaya lines．A plant expression vectorpCAMBIA2300—35S-CP—RNAi-OCSwasconsturcted．Thevectorwastransferredintopapayacallus by particlebombardment，selected on kanamycin media．Transformation papaya lineswere validated by PCR，RT- PCR，ddPCR，etc．The transgenic lineswere further challenged with viral inoculation．The results showed that transgenicline474 wassinglecopy insertionand insertionsitewaslocated in papaya chromosome7 supercontig_ 61 at717141bp；non-transgenicline 1280 accumulatedhigherconcentration ofviursand developed symptoms，while tran