大鼠肝星状细胞系的建立和其生物学特性的研究.pdf

维普资讯 第 34卷 第 3期 解 剖 学 报 Vo1．34．No．3 2003年 6月 ACTA ANATOMICA SINICA Jun．2003 大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究 冷希圣 翁山耕 李涛 魏玉华 彭吉润 杜如昱 (北京大学人民医院肝胆外科 中心 ，北京 100044) [摘要] 目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。 方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离 心的方法分离培养大鼠的HSC；通过体外长期传代培养后建立 1株细胞系，应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测 定、细胞生长 曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测 HSC 的收缩等方法对其生物学特性进行研究。 结果 HSC细胞系已传了78代，保持着肌成纤维样细胞的形态学特 点。细胞倍增时间为 36．5h；细胞的染色体众数 42条 ，为正常大鼠体细胞的染色体表型；双层软琼脂培养未见细咆 克隆形成 ；免疫细胞化学检测表 明，细胞系表达 Desmin、GFAP、I型胶原、lll型胶原、a—SMA、iNOS、ICAM一1、TGF-a； RT—PCR检测表明，该细胞系表达TGF—B、ICAM一1；聚硅酮膜培养法显示 ，HSC细胞系能在 ET一1作用下产生收缩反应。 结论 HSC细胞系符合建系标准 ，是 1株新建立 的大 鼠肝星状细胞系，命名为 rHSC一99，可作为肝硬化 、门静脉高压 症实验研究的模 型。 [关键词】 大 鼠肝星状细胞系；细胞系；细胞培养；大鼠 [中图分类号] Q228 [文献标识码] A [文章编号] 0529—1356(2003)03—269 ESTABLISHMENT OFA NEW RATHEPATIC STELLATE CELL LINE rHSC．99W ITH CHARACTERISTICSOFM YOFIBROBLAST CELL LENG Xi·shengI ，WENG Shan·geng，L1Tao，WE1Yuh·ua，PENGji-IMfl，DU Ru-yu (DepartmentofHepatobiliarySu~eu，PekingUniversityPe~le’Ho~ital，Beijing 100044，China) [Abstract] Objective Toestablishandidentifyanewrathepaticstellatecellline(rHSC一99)．Methods Liverinvivo perfusionofcollagenaseanddensitygradientcentrifugationwereusedto isolatehepaticstellatecellfrom anormalrat．Cellswere maintainedincultureformuhiplepassages．Cellproliferation andmorphologicalcharacterizationwere studiedon 60passageof HSC．Immunocyt0chemisryandRT—PCRwereusedtodetecttheexpressionofdemin，GFAP，a—SMA，collagentype 1andⅢ ， iNOS，ICAM一1，TGF-a，IL-IO andTGF-a in 60 passageofHSC．Sixty passagecellswerecultured on silicone membrane to investigatethecellcontraction．Gimsastainmethodwasusedtoanalyzekaryotype．Results rHSC一99cellhasundergone：78 passages．It’smorphologicalcharacteristicsrese