大鼠正常肝与再生肝的肝细胞分离_鉴定及纯度_活性分析.pdf

第26 卷 第12 期 河 南 科 学 Vol.26 No.12 2008 年12 月 HENAN SCIENCE Dec. 2008 文章编号：1004-3918 （2008）12-1492-07 大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、 鉴定及纯度、活性分析 1，3 2，3 2，3 2，3 2，3 王文博 ， 谢来峰 ， 王 望 ， 王 磊 ， 徐存拴 （1. 中国海洋大学水产学院，青岛 266100 ； 2. 河南师范大学生命科学学院，河南新乡 453007 ； 3． 河南省－科技部共建细胞分化调控重点实验室，河南新乡 453007） 摘 要：按Higgins 等方法制作大鼠2/3 肝切除（parital hepatectomy ，PH）模型，用两步灌流法分散肝脏细胞，用60 ％ Percoll 密度梯度离心分离肝细胞，用免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver ，RL）、分散的肝脏细胞及 分离的肝细胞中白蛋白（albumin ，ALB）和葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase ，G-6-P），用蛋白免疫印迹方法定量 肝细胞的ALB 和G-6-P，用RT-PCR 定量肝细胞的ALB 和G-6-P mRNA . 初步证实纯化的细胞中，ALB 和G-6-P 阳性 细胞占96 ％ 以上；PH 后各时间点纯化的肝细胞的ALB 和G-6-P mRNA 量稳定，相应的蛋白量亦稳定. 表明改进后 的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点. 关键词：大鼠；细胞分离和鉴定；肝细胞；基因表达；标记蛋白 中图分类号：Q 2－33 文献标识码：A [1] [2] [3] 肝脏是人体的重要器官 ，肝脏的强大再生能力更令人赞叹 . 目前，常用大鼠2/3 肝切除模型 研究肝 [4] 再生机理，但肝脏由多种细胞组成 ，直接用多种细胞混在一起的肝组织阐明肝再生机理比较困难，若将再 [5] 生肝的各种细胞分离出来分别进行研究，将会使复杂问题简单化、明晰化 . 为此，作者从建立分离、鉴定占 大鼠肝脏质量分数75 ％ 的肝细胞（hepatocytes ，HC）入手，以进一步建立分离纯化其他肝脏细胞方法. 目前， [6-8] 虽然已有一些分离和鉴定肝细胞的方法 ，但这些方法存在分离肝细胞时间长、细胞纯度和活性相对较低、 [9-11] 肝细胞收率不高、mRNA 完整性较差等问题 . 为进一步改善和解决这些问题，作者在前人工作的基础上， [3] [12] [13] 用两步灌流法分散肝脏细胞 ，用Percoll 密度梯度