兔子免疫血清与无免疫血清.ppt

兔子免疫血清和无免疫血清成分分析比较 作者：钟园园、郑晓阳 目录 前言 材料、仪器设备与方法 结果分析 讨论与总结 前言 血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1 、α2 、β、γ- 球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。动物在生命活动过程中常常会受到病原微生物的侵袭而发病甚至死亡。为了防止动物发生传染性疾病,所以常常对其进行免疫接种。动物获得免疫能力对自身生理有什么影响，这是一个值得研究的方向。本实验主要是粗略地测量血清中的成分在免疫后与无免疫中的含量变化，从宏观上把握免疫对血清成分含量的影响。 前言 血清总胆固醇测定是血脂分析的常规项目,目前国内大多数实验室的常用方法有酶法、硫酸一磷酸一高铁显色法、硫酸一醋醉直接显色法、硫酸一醋酥煮沸显色法及邻苯二甲醛一硫酸显色法和邻苯二甲醛法等。本实验我们采用的是邻苯二甲醛法。其在临床上的意义：血清中总胆固醇的浓度可作为脂类代谢的指标，但脂类代谢又常与糖类及激素的代谢密切相关，故在其他物质代谢异常时亦可影响血清总胆固醇的浓度。 前言 血清谷丙转氨酶活力的测定为一种较好的早期诊断肝炎的方法之一。其在临床上有重要意义：正常时，谷丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放入血中。所以血清中此酶活力很低。当肝脏、心肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各种酶释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清中此酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的依据。本实验采用纸层析法和比色法探究动物免疫对血清成分含量的影响。 前言 分离、纯化与鉴定γ—球蛋白的方法很多，本实验用醋酸纤维素膜电泳法对蛋白质进行量化、比较及特性鉴定，是较为经济、快速且可重复的方法。本次血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定覆盖了传统生化技术，包括离心技术、层析技术、分光光度法和电泳技术。 1. 1材料来源及处理 4号血清：由生命与环境科学学院生化试验室提供。从四只兔子分别提取血清用于生化实验，其中有一只兔子是有免疫的，其它的是未免疫的，血清提取出后置于冰箱冷藏。 （血清主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分就包括白蛋白、α1 、α2 、β、γ- 球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶。大量实验证明将血清密封放入-10 ℃冰箱中长时间保存,由于水分和这些化学成分没有变化,因此新鲜血清和-10 ℃保存一年的血清醋酸纤维素薄膜电泳后的血清白蛋白、α1 、α2 、β、γ- 球蛋白的百分值无显著差异,两种血清的甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶也无明显差异。完全能满足实验的要求。这不仅不浪费血清,而且方便又节省实验经费）。 猪肝：由生命与环境科学学院生化试验室提供。几天前从菜市场买来置于冰箱里保鲜处理，到要用时取出（同上，冷藏对谷丙转氨酶影响不大）。 1.2 仪器与设备 1.2.1 凝胶柱及架 1.2.2 30℃、37℃水浴箱 1.2.3 定时器 1.2.4 微量进样器 1.2.5 分光光度计 1.2.6 透析袋 1.2.7 电炉 1.2.8 电子天平 1.2.9 水浴锅 1.2.10 离心机 1.2.11准确的加样器 1.4 方法 1.4.1 血清胆固醇的定量测定：邻苯二甲醛法 1.4.2 血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定：盐析法分离提纯蛋白质、透析法脱盐与蛋白质浓缩、凝胶过滤层析、醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血清清蛋白 1.4.3 谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定：纸层析法、分光光度法测定血清丙转氨酶的活力 结果分析 2.1.1血清总胆固醇的含量 图1血清总胆固醇标准曲线 图2 兔子血清总胆固醇含量 由图2可知免疫兔子血清中胆固醇含量比未免疫的兔子低很多 凝胶层析洗脱结果 图3 凝胶层析洗脱曲线图 由图3可知蓝色的蓝葡聚糖比黄色的重铬酸钾先流过凝胶柱，且蓝葡聚糖在第10管，即约流出197ml时,达到溶质数最大,即浓度最大；重铬酸钾在第24管，即约流出473ml时达到溶质数最大 全血清、清蛋白和γ-球蛋白 电泳结果 兔子血清中谷丙转氨酶的活力单位测定 图5 A520nm下酶活力单位的标准曲线 图6 纸层析结果图 2．2讨论与总结