乙氧基磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

Techniques and Methods 技术与方法 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2010, 37(9): 1016~1024 乙氧基磷酸酯类有机磷农药单克隆 抗体的制备与鉴定* 张丽杰 潘家荣** ( 中国农业科学院农产品加工研究所，农业部农产品加工与质量控制重点实验室，北京100193) 摘要 制备针对乙氧基磷酸酯类有机磷农药的单克隆抗体，以此为基础建立该类农药的快速免疫筛选检测方法．以二乙基磷 酸乙酸为通用结构半抗原，分别使之与牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白共价偶联，合成免疫原和包被原并对其进行结构鉴定．偶 联成功后的免疫原用于免疫Balb/c 小鼠．将免疫成功小鼠的脾细胞与小鼠SP2/0 骨髓瘤细胞融合，筛选能稳定分泌抗乙氧基 磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株．获得的小鼠腹水用辛酸- 硫酸铵法纯化，所得纯化抗体以琼脂双扩散法鉴 定其免疫球蛋白类型，间接竞争ELISA 方法测定其对半抗原的灵敏度、特异性和亲和性．结果表明，该抗体分泌IgG1 亚类 7 的单克隆抗体，且与二乙基磷酸乙酸的亲和性较高(1.4×10 L/mol) ，所得抗体对毒死蜱、对硫磷、丙溴磷、氧化乐果、除线 磷、二嗪农、溴硫磷、辛硫磷、喹硫磷、三唑磷等农药有特异性反应．该检测技术可用于上述农药的快速定性或定量检测． 关键词 单克隆抗体，广谱性，有机磷农药，酶联免疫 学科分类号 Q2 ，Q5 ，R15 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2010.00050 有机磷农药(OPs)研制已有70 年的历史，种类 步筛选．但传统的酶联免疫分析多只针对单一农 多达数百，在世界范围内被广泛使用，我们常见的 药，虽然凸显了免疫检测法在高特异性方面的优 乐果、对硫磷、甲胺磷、马拉硫磷等都属于这类农 势，但也限制了其检测范围．以多种有机磷农药分 药．有机磷农药也是我国使用量最大的农药，产量 子中共有官能团作为目标抗原决定簇设计通用人工 [1] 占全国农药总量的一半以上 ．尽管大多数OPs 显 抗原，继而制备能识别含有这种共有结构的一类有 示出较低的环境持久性，但近几年，急性中毒事件 机磷农药的单克隆抗体，建立可用于多残留分析的 [2] 时有发生且呈明显上升趋势 ．尤其是在生长期 免疫检测法不仅保持了免疫分析法高灵敏度和高特 短、害虫多，因此施药量大且多混配多种农药以增 异性的优势，还可突破传统免疫检测法的瓶颈，拓 强杀虫效果的果蔬生产中，有机磷农药残留超标问 展其检测范围．基于此，在对多种有机磷农药的分 [3] 题更为严峻 ． 子结构进行分析比较后，以二乙氧基磷酸基团作为 高效、经济的快速检测技术可有效监察有机磷 目标抗原决定簇，合成并鉴定了人工抗原，并通过 农药残留超标情况，进而为消费者健康提供保障． 细胞融合、克隆化筛选出了2 株能够稳定分泌针对 目前用于检测OPs 多残留的方法主要有仪器分析 该通用结构的单克隆抗体的细胞株 MOZ-1 、 法(如色谱、波谱、色质联用等)、免疫检测法等． MOZ-2 ，并对两种抗体的性能进行了研究． 仪器检测法虽然灵敏度高，但成本高、劳动强度 大、样品前处理复杂、需要熟练的技术人员在专业 实验室操作，难以满足快速、经济地进行现场实时 [4] * 国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10Z449). 检测或样品大批量筛选的要求 ．免疫分析方法基