嵌合型猪圆环病毒PCV1-2 和PCV2 ORF2 真核表达.pdf

嵌合型猪圆环病毒PCV1-2 及PCV2 ORF2 真核表达 质粒对商品猪的免疫保护研究1 程旭，宋益，盛瑜，高崧，刘秀梵 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室，江苏扬州 （225009 ） E-mail ：gsong@ 摘 要：应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒 PCV1-2 及真核表达质粒 pcDNA3.1/V5-His-orf2 作为免疫原免疫母源抗体ELISA 效价在0.07-0.60 不等的商品猪，九 头猪随机分为四组，第1 组为3 头，其余3 组均为2 头。第1 组肌肉注射免疫TCID50 为10 3.5 的 PCV1-2 病毒/头，第 2 组肌肉注射真核表达质粒 200µg/头, 第 3 组肌肉注射空载体 （pcDNA3.1 ）200µg/头, 第4 组不免疫作为攻毒对照组。在免疫后42 天，PCV1-2 组及真核 表达质粒组产生了 PCV2 抗体。免疫后 42 天所有组攻毒 PCV2 和 PRRSV ，剂量分别为 4.5 6 2×10 TCID50/头和10 TCID50/头。攻毒后21 天攻毒对照组猪淋巴结比免疫组猪显著肿大， 免疫组猪血清、淋巴结中PCV2 病毒载量低于对照组，攻毒对照组猪淋巴结中PCV2 抗原含 量高于免疫组，这些结果表明嵌合型猪圆环病毒PCV1-2 及真核表达质粒肌肉注射免疫商品 猪后，对PCV2 感染能产生保护性免疫应答，有可能成为候选疫苗。 关键词：嵌合型猪圆环病毒PCV1-2 ，真核表达质粒，免疫保护 [1] 猪圆环病毒（porcine circovirus ，PCV ）是由Tisher 等于1974 年在PK15 细胞中发现 。 该病毒为20 面体对称，无囊膜，以滚环方式进行复制，其基因组是一种环状、单股负链DNA 。 该病毒有两个基因型：PCV1 和PCV2 。前者无致病性，广泛存在于猪群中；后者首先由Allan 等从患断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS ）的 猪群中分离并证明为 PMWS 的重要病原[2]，该病以进行性消瘦，呼吸困难，淋巴结肿大， [3，4] 发育迟缓，黄疸及皮肤苍白等为主要特征 。 自1996 年加拿大首次报道PMWS 以来，该病已经成为严重危害世界养猪业的重要传 染病。该病发病率高，死亡率可达 5%~40%，康复猪成为僵猪。在我国，朗洪武等于 2001 年首次报道检测到PCV2 抗体[5]，随后其他研究者的血清学和病原学研究证实PCV2 在我国 猪群中广泛存在[6，7] 。 法国学者Blanchard 报道，利用 PCV2 ORF2 基因研制的PCV2 DNA 疫苗及其与表达 巨噬细胞集落因子（GM-CSF ）的真核表达质粒联合免疫猪群，结果显示免疫后的猪群可抵 抗PCV2 的攻击[8] 。Kamstrup 等用含PCV2 ORF2 基因的核酸疫苗免疫小鼠，在首免后62d 小鼠体内可检测到高水平的抗体[9] 。美国学者 Fenaux 等以 PCV1 为骨架构建了嵌合病毒 PCV1-2 ，也可以诱导机体产生具有保护性的抗体[10] 。一些用于预防PCV2 感染的疫苗正在 应用于临床，如供母猪和后备母猪使用的PCV2 灭活疫苗；富道公司（Fort Dodge ）生产的 嵌合型猪圆环病毒2 型感染性DNA 克隆疫苗（Suvaxyn PCV2-One Dose），指定3 －4 周龄 仔猪单剂量使用。在美国和欧洲的几个攻毒性研究表明，猪在感染前接种Suvaxyn PCV2-One Dose, 与未接种的相比，病毒血症和组织病理学病变明显下降。英特威（Intervet ）生产的 PCV2 疫苗是基于杆状病毒表达的PCV2 ORF2 蛋白。本