1st 免疫学试验 油镜使用.ppt

显微镜的构造 机械部分： 镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、 微动螺旋等； 光学部分：反光镜，聚光器，物镜，目镜。 普通光学显微镜 (油镜) 的使用 油镜的使用特点 1.增加照明亮度 透镜 透镜 玻片 玻片 香柏油 加油前 加油后 2.增加显微镜的分辨率 油镜的使用特点 　D=λ/2NA λ为光波波长 NA为物镜的数值孔径值，取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率。 以空气及水为介质时，NA小于1，而香柏油为介质的油镜，NA一般在1.2~1.4之间。 油镜的使用方法 1. 在低倍镜下选好视野后，调至视野中心，用油镜观察。先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。 2. 在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 3. 从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，（或镜筒下降），使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。 4. 从接目镜内观察，上调聚光器，使光线充分照明。用细调节旋钮将载物台徐徐下降（或镜筒上升），当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。 标本观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用擦镜纸擦去残留在镜头上镜油，注意向一个方向擦拭。 如果油已干，用干净擦镜纸沾二甲苯擦去镜头上的油迹，然后立即再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 实验完毕之后将显微镜各部分还原，将显微镜送回显微镜室，取、放时应一手握住镜臂，一手拖住底座，切忌单手拎提。 油镜的维护方法 非特异性免疫 1 生理屏障 2 吞噬细胞的吞噬作用 3 体液或组织中的抗菌物质（补体，干扰素，其他抗菌物质如溶菌酶） 三、吞噬细胞及其功能（标本片观察） 小吞噬细胞：主要是指中性粒细胞。 通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。  大吞噬细胞：单核细胞和巨噬细胞 吞噬的颗粒较大，如鸡红细胞。 吞噬细胞吞噬作用 巨噬细胞吞噬鸡红细胞 球菌 鸡红细胞 巨噬细胞 中性粒细胞吞噬细菌小吞噬图 小吞噬（中性粒细胞吞噬葡萄球菌） 大吞噬（巨噬细胞吞噬鸡红细胞） 巨噬细胞 鸡红细胞 中性粒细胞 葡萄球菌 T细胞膜表面有绵羊红细胞 (sheep red blood cell, SRBC) 受体，称为E受体 (erythrocyte E, CD2) 。在一定的实验条件下，T细胞能与SRBC 结合, 在显微镜下可见由红色SRBC围绕紫色T细胞形成细胞团, 称为E花环。 E受体是人类T细胞所特有的表面标志。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的愈合，考核药物疗效等 。 四. E 花环实验（观察标本片） E花环实验结果(绘图) E 花 环 T细胞 SRBC 结合三个以上SRBC的淋巴细胞为E花环细胞 在室温于数分钟内形成花环的T细胞，称为活性E花环形成细胞。而在4oC冰箱过夜后形成花环的T细胞，称为E花环形成细胞总数 (Et) ，Et百分率只反映机体外周血中成熟T淋巴细胞总数。 E花环细胞数 E花环细胞形成= ×100％ 百分率 E花环细胞数＋正常淋巴细胞数 五. 淋巴细胞转化试验 (观察标本片) T淋巴细胞经有丝分裂原 (PHA植物血凝素或ConA刀豆蛋白A) 或特异性抗原刺激后可发生转化，由淋巴细胞转变成淋巴母细胞。 淋巴细胞转化率的高低可以反映机体T细胞总体水平的应答功能，从而反映机体的细胞免疫水平，不但可作为变态反应性疾病和免疫缺陷病的辅助诊断，还可用于自身免疫性疾病和各种肿瘤的病因研究及其预后判断。