病毒感染草鱼细胞产生类干扰素物质研究.pdf

维普资讯 锫 7卷 第 l期 宿 毒 学 报 VoI．7 NO．1 年 3 j CltiNESE IOURNAL OF VIR0LOGY March I99l 病毒感染的草鱼细胞产生类干扰素物质的研究 江育韩 李正坎 (中国科学院水生生物研宄所，武汉 ) 握娶 某些草鱼细胞系在双链RNA瘸毒诱导卞能产生一种抗病毒蛋白，并存在 超诱导 现象。这种抗病毒蛋 白耐热、耐酸，对脂溶剂和棱酸酶的作用不敏感，但其抗病毒 活性 能被胰蛋 白酶破坏，l60000g超逮离心不沉降。这种抗病毒蛋自对病毒感染细胞 的抑制作用具有 宿主特异 性lf口广谱抗满毒特性。它是通过细胞内的RNA和蛋 白质 台成途径抑制病毒增殖的。该 抗病 毒蛋 ， 自在生物学特 ，理化特 陛和抗满毒机制等方面均类似于人干扰素。 关键词 干扰素 草鱼类干扰素 草鱼细胞系 草鱼出血病病原及其防治的研究已进行 了多年。但在病源研究上进展缓慢，原因是细胞 病变 (CPE)不够理想，尤其是可重复性不稳定 研究者最感棘手 的就是寻找敏感细胞。这 一 现象使我们考虑可能存在某种干挠现象 经初步探索后发现，感染了革鱼呼肠孤病毒的草 鱼鳍条细胞的上清液，可以抑。甜病毒性出血性败血症病毒在FHM细胞中出现CPE。但 随草 鱼呼晒孤病毒在细胞中的传代，这种抑制能力会逐渐降低。逸提示，这种抑翩不太可能是糍 毒之间的相互干扰，而是某种抗病毒因子的作用。近两年的深入研究结果表明，这种因子在 生物学特性、理化特性和抗病毒机制等方面均类似 于人干扰素。因此，我们称它为 “草鱼类 干扰素”。本文报道草鱼细胞被病毒诱 导后产生抗病毒 因子的现象，以及对该因子部份生物 学特性和理亿特性的研究结果。 材料与方法 (一)细胞培养 所用细胞有中国科学院水生生物研究所建系的CO(草鱼性腺细胞 )、CK (草鱼肾细 胞 )和CAR(鲫鱼囊胚绍胞 )、GCF (草鱼鳍条细施 )，长江水产研究所建系的CIK (草鱼肾细胞 ) 以 及EPC(鲤鱼上皮细胞 )、CLC(鲤鱼自细胞 )，FHM (Fatheadminnow~胞 )，RTG一2(虹鳟鱼 性腺细胞 )、RI(虹鳟鱼旰细胞 )、PG (梭鱼性腺细如)和CHSE(Chinooksalmon囊胚细 胞 )。这 些细胞豫特别指明者外，均按常规用盒10眄胎牛血清的l99培养液培葬和传代。 (=)病毒 VHS(病毒性 出血性败血症病毒Viralhemorrhagicsepticemiavjrus)．PFR(梭 鱼幼鱼弹状病毒Pikefryrhabdovirus)，csv (大马哈鱼呼西孤病毒Chum Salmonr8oviru5)， 33／8S(一种新分离到的杆形扁毒，未定名)哺]，FV (青蛙病毒Frogviru5)，Reo-2(人砰肠孤 病毒 Ⅱ型)，IPN (传染性睫脏坏死病痛毒Infeetiouspanereaticn8CIO$fsvirus)Ab株，He株、Sp林 ,fll87／7 ，GCRV (草鱼呼肠孤f毒R803firusofgiasscarp)瞧 口株，广济株和麻城标。 (三 )抗病毒 因子的话生和分膏 取感染了csv病毒的co细胞 的E清液，l60000g超速离心驯、时后 ， 小 L、收集离心管上鄙t／3的澄清俄津。按下述方法 定超离心前、后 清液的抗病毒衍性。 竹将此J清艘 * 宰 自爨科 监生资助J页 啦稿 日期：1989年I2月18日，1909年0 l013任回。 维普资讯 1期 病毒感染的草鱼细胞产生类干扰素物质的薪究 接种于CHSE细胞 ，测定其CSV病毒的含量。 (四)抗病毒园子殛其滴度的检洲方法 参照文献[3] 具体做法如下：将FHM细胞接种于微 孔滴定 埂 ，25’C培养24／J~对，加入 2倍系列稀释的含抗病毒圈子的样