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食用菌栽培课件23 第九章菌种的分离、提纯、扩大、培养与保存 第一节菌种的分离与提纯 菌种的分离、提纯、扩大、培养与保存简介 菌种的分离与提纯是获得一级菌种的途径。 菌种的扩大与培养是为了适应生产的需要，扩大菌种数量的过程。 菌种的保存，是菌种优良性的保存，是食用菌生产得以不断发展的前提。 这些过程的操作都有一个共同的要求，即保证纯培养。纯培养要求无菌操作 无菌操作规程aspepsis operation regulations 1任何操作必须在无菌环境下进行。这就要求用空间消毒方法，净化操作环境 ，达到局部空间消毒所要求的净化程度。 2任何操作器具都必须经过消毒处理，尤其是分离、接种的直接用具。 3任何一种培养基开口(拨除棉塞)时，都 应稍倾斜向下，并在酒精灯火焰附的无菌区域中进行，即火焰封口。操作后棉塞也在火焰上适当燎烤至微焦再塞回。 4操作动作要迅速、敏捷，越快越好。 第一节菌种的分离与提纯strains’ separation and purification 将有价值的子实体的局部或孢子移接在斜面试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为分离。 在分离过程难免出现些杂菌，将所需要的菌丝提取出来称为提纯。 菌种的分离与提纯 一、菌种资源的取得 (一)野外标本采集 (二)栽培场种菇的选择 二.菌种分离 (一)分离前的准备 (二)组织分离 (三)木腐菌基内菌丝分离 (四)孢子分离 1.采集的季节collection season 大型真菌子实体的形成各有其适宜的季节和一定的生态环境。 各地一年四季都有相应的食用菌生长，中温结实性菌类多集中在处暑至白露、谷雨至夏至之间发生。 低温结实性菌类在大雪至春分之间出现。 处暑前后菌类的种类与数量最多，但常受到处暑前降雨量多寡的影响，使之提前或推迟发生，甚至出现大年小年。 2.采集工具 collection tools 标本篮筐、纸质标本盒、白蜡低袋、号牌钢卷尺、手持海拨仪、温度表、指南针、铲、砍刀、手锯、照相机、彩色胶卷、记录卡、蛇伤药、急救外用药及分类参考书。 3.生态环境的了解Understanding entironment 采集标本时，必须注意到菌类的生态环境，特别是要弄清与植被和植物群落组成的种类。 菌类分解类型属于腐生、寄生还是共生。与乔木、灌木、草本形成共生菌根的植物名称。 土壤结构，土壤有机质成分、酸碱度，土壤质(砂丘真菌)。 了解采集地的气温、地温、湿度、光照度等，为菌类开发提供原始资料。 4.形态观察与记录configuration observing and recording 采集时尽可能采集到完整的子实体。先用彩色摄影将菌类的生态环境，子实体发育的不同阶段拍摄。 把标本的形态、大小、颜色、附属物、着生位置详细记录。 特别肉质菌类，鲜菇烘干后其色泽、气味、大小、形态都会发生变化。需要注意的是某些菌类的菌盖或菌柄受伤之后易变色(如某些牛肝菌)，有的会流出乳汁，乳汁颜色有的还会有变化。有的菌类还具有特殊的气味。 5.采集方法 collection method 野外采集时，特别要注意保持子实体各部分的完整，保护容易脱落的菌环、菌托、和鳞片等附属物。 有些菌类的菌托半掩埋于土内，有的菌柄在土层内延伸很长的假根，如长根菇。 为了采得完整标本，要用小铲挖掘，不能用手拨，以免损坏基部。残缺的标本难以倚做出正确的分类鉴定。 对于木腐生菌类，用锯将所采标本的段木锯下。作为分离用的种木。 6.孢子印采集spore marking collection 显微镜下，单个孢子是无色的，但众多孢子聚集在一起，常呈现颜色。这是分类的依据。从中还能看菌褶排列状况，在无菌条件下所获得的孢子印，还可以为杂交育种提供材料。 采集孢子印最简单的方法是选用刚破菌膜不久的菇伞，去掉菇柄，静置在纸片上数小时即可。对于多孔菌或革菌类，可在纸片下放置一小杯水，以加快孢子的弹射。 7.鉴定identification 标本采集之后，进行分离之前，先要正确判断其在分类上的地位，才能利用前人的研究成果，也可以从已知的种间亲缘关系，了解其生物学的习性，加快驯化探索的进程。 参考书周茂繁《植物病源真菌属分类图索》 应建浙、赵继鼎等《食用蘑菇》《毒蘑菇》科学出版社 邵立平项纯梯等《真菌分类学》中国林业出版社 8.注意事项attentions (1)最好在同一号标本中能采到不同发育阶段整套标本，研究的个体越多所得出的结果越准确。 (2)采集后肉质担子菌类的子实体容易变质，腐败，或遭昆虫侵袭，因而进行组织分离、孢子印的采集、标本记录整理、干燥等均应在当晚进行，野外烘烤时炭火温度控制在50℃，防止烤焦。 (3)采集的标本供分离的材质含水量过高的标本，可放在通风处，风干一段时间再分离。 (4)将所采集标本