深度血液稀释对大鼠Treg细胞与组织代谢的影响.pdf

深度血液稀释对大鼠 T reg 细胞和组织代谢的影响 王东红 , 石翊飒 1兰州大学第二医院麻醉科，甘肃兰州（730030 ） E-mail ： wdhong05203@126.com 摘 要: 目的: 探讨深度血液稀释（Profound homedilution ）对大鼠T reg 细胞及组织代谢的 影响。方法: 健康雄性 SD 大鼠20只，体重350 ～400g,戊巴比妥腹腔注射麻醉后，解剖颈总 动脉连接 L-420E 动物测压系统监测血压(BP)和心率(HR)，并用于放血和测定血气。解剖 股静脉后留置24G 套管针，备采血和输液[6%贺斯（HES ）和携氧液]用。当Hct 值达目的 值（20% ）时，静脉输液停止。分时段T0 （稀释前）、T1 (稀释后即刻)取静脉血各1ml ，置 ADTA-K2 抗凝管中送流式细胞仪检测 CD4 、CD25；稀释结束后24小时，处死动物，取动物 心、肺、肝、肾，行光镜下组织病理学观察。结果: 有三只动物被剔除（有一只出现气管内 分泌物增多而发生窒息，另有两只标本凝固），其余17只 Hct 值均达目的值(17.41±1.28)且动 物全部存活。输液量30±5ml ，动物放血量10±2ml ，用时60±10min；血液稀释后 CD4+CD25+、 氧分压升高显著（P0.01 ），病理切片显示组织无缺血缺氧改变及水肿表现。结论: 应用携 氧液行深度血液稀释，可使大鼠外周血中 Treg 细胞及血氧分压明显升高，且血流动力学稳 定，组织无缺血缺氧及水肿改变。 关键词: 深度血液稀释,携氧液,T reg 细胞 血液稀释是大家公认的、有效的血液保护方法，但是轻度和中度稀释都有一定的限度， 当红细胞压积（Hct ）达到输血指针(transfusion trigger)时，尚需输异体血，才能确保安全。 因此，探讨和寻找新的血液保护方法和技术势在必行。有研究报道[1]，极度血液稀释可使Hct 达到很低（11%）的程度而不需要输血，机体氧供仍然能够保证的一种节约用血的新技术， 但是，极度血液稀释在临床应用还尚需时日。本实验拟行深度血液稀释后，观察大鼠外周血 T reg细胞的变化，以探讨深度血液稀释对机体细胞免疫功能和组织代谢的影响，为深度血 液稀释的合理应用提供理论依据。 1 资料和方法 1.1 实验动物与方法 选用健康雄性SD大鼠20只（购于上海斯莱克实验动物有限公司），合格证号：SCXK(沪) 2003-0003 。体重350g～400g, 3%戊巴比妥腹腔注射（1.5ml/kg）麻醉，解剖股静脉后留置 24G套管针，备采血和输液用。微量泵输注6%贺斯（HES，200/0.5，费森尤斯公司）和携氧 液(自制)，先输HES，后输携氧液，HES和携氧液之比为1:2 ；解剖一侧颈总动脉，远端结扎， 近端置入硬膜外导管约2cm后妥善固定，接L-420E动物测压系统监测血压(BP)和心率(HR)， 并用以放血和测定动脉血气。输液开始时，取动脉血查血气并同时由尾静脉取静脉血（T0） 标本于ADTA-K2抗凝管中待测，输液约10ml左右时开始放动脉血（放血速率以观察BP、HR稳 定为宜），当Hct达目标值时，输液停止，同样取动脉血查血气并同时取尾静脉血（T1）标本 1 于ADTA-K2抗凝管中待测。稀释结束后，结扎颈总动脉和股静脉并缝合伤口，动物正常饮食， 于24小时后静脉注射过量戊巴比妥处死动物，取动物心、肺、肝、肾，福尔马林固定，HE 染色，光镜下组织病理学观察。 1.2 试剂与仪器 异硫氰荧光素（FITC）标记的抗大鼠CD4单克隆抗体（IgG1），澡红蛋白（PE）标记的抗 大鼠CD25单克隆抗体（IgG1）及同型对照IgG1 R-PE（杭州联科生物技术有限公司）；流式细 胞仪（EPICS XL，美国COULTER公司），红细胞裂解仪（Q-PREP，美国COULTER公司），血气分 析仪，L-420E动物测压系统。 1.3 携氧液的配制 参照袁氏法[2]，乳酸林格氏液500ml，临用时采