选择性荧光探针.ppt

2、Job plot analysis 溶液中探针1: Fe2+=2:1形成络合物时时，工作曲线的拐点为0.67(Fig. 2A)；当Fe2+的浓度范围为2–24uM时的荧光强度（ Fig. 2B ）。 3、The pH-controlled emission measurement 这个图谱表明自由探针1在不同pH缓冲液下的荧光强度；在pH范围为5.5-8.0时荧光探针1对铁离子具有响应，而荧光强度的变化小于10％。 4、 Mechanism analysis 罗丹明络合物在构造“关-开”荧光探针时是一个理想的模型，荧光探针1的发光性能对应于“关-开”的荧光信号，这种信号据于螺环和开环之间的转换机制。加入的金属阳离子导致可逆或不可逆的螺环开环反应，Fe2+能结合中间的四个氧原子和乙酰吡啶，从而导致开环。两组协调 {O2N2} 单位的群体能够满足Fe2+的饱和配位层结构。 5、Aser scanning confocal microscopy.（激光扫描共焦显微镜技术） 探针1会对活细胞内的Fe2+浓度的变化具有响应；细胞内含Fe2+和探针的场发射图片表明细胞成像的实验是可行的（ C图）。 Conclusions 1、据于罗丹明络合物“关-开”荧光探针高产量合成。 2、各种金属离子的选择性在PBS缓冲液（pH 7.4）的影响下，结果显示探针1对Fe2+高选择性。 3、用2:1的比例形成的络合物。该 “关-开”荧光取决于罗丹明探针1的螺环和开环形式之间的转换机制。 4、共聚焦激光扫描显微镜的实验已经证明，该探针可用于活细胞中Fe2+的监测。 5、本实验中罗丹明络合物探针可进一步探索，以获得高选择性和灵敏度探针。 FRET荧光探针分子除包含识别基团和连接部分外，还含有两个荧光基团；这两个荧光基团一个是能量给体(Energy donor,D)，另一个是能量受体(Energy acceptor,A)。共振能量转移(FRET)是一种非辐射的能量转移，指在一定波长的光激发下，处于激发态的能量给体分子把能量非辐射地传递给附近的基态能量受体分子，然后受体通过荧光或非辐射的方式释放能量的过程。 选择性荧光探针 荧光探针的概述 荧光探针的设计原理 荧光探针的识别原理 荧光分子探针的特点 文献讲解 荧光探针概述 荧光探针是建立在光谱化学和光学波导与测量技术基础上，选择性的将分析对象的化学信息连续转变为分析仪器易测量的荧光信号的分子测量装置。 荧光分子经过特殊的设计，能够选择性识别待测物，再将这种识别信息转换成荧光信号传递给外界，具有这种功能的分子就是荧光探针分子。 荧光探针分子的结构 荧光探针分子通常由三部分组成： 识别基团（receptor） 荧光基团（fluorophore） 连接体部分（spacer） 识别基团决定了探针分子的选择性和特异性，荧光基团则决定了识别的灵敏度，而连接体部分则可起到分子识别枢纽的作用。 荧光探针与分子结构的关系 荧光探针的性能与探针的共轭体系大小、共轭π键体系的共平面性和刚性程度、分子母体上取代基的种类及取代基位置和几何构型等因素相关。 给电子取代基如：-NH2，-NHR，-NR2，-OH，-OR和-CN。 吸电子取代基如：-C = O，-COOH，-CHO，-NO2和-N=N-。 荧光体取代上重原子后，荧光减弱，而磷光往往相应增强。重原子的取代，一般指的是卤素(Cl，Br和I)的取代。芳烃取代重原子后，荧光强度一般随卤素原子量的增加而减弱，这一效应称为“重原子效应”。 荧光分子探针的设计原理 键合-信号输出法 置换法 化学计量计法 1.键合-信号输出法 荧光 连接体 识别 被分析物 信号输出 基团 基团 键合-信号输出法是指将探针中的识别基团和荧光基团通过共价键连接起来设计荧光探针的方法。 作为荧光基团的香豆素和作为识别基团的邻氨基苯硫醚以席夫碱相连，加入锌离子后，与硫醚上的硫原子、席夫碱上的氮原子及香豆素上的氧原子配位得到结构2，抑制了席夫碱上C=N键的旋转，实现了荧光从无到有的变化。 2、置换法 识别基团 被分析物 识别基团 荧光基团 结合荧光基团 结合被分析物 该原理是利用识