猪白细胞介素_2基因在大肠杆菌中的表达和其生物学活性测定.pdf

( ) Vol . 37 No . 11 第 37 卷 　第 11 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 2009 年 11 月 J ournal of Nort hwest A F U niver sit y (Nat . Sci . Ed . ) Nov . 2009 猪白细胞介素2 基因在大肠杆菌中的表达 及其生物学活性测定 1 1 2 1 1 3 1 郭小参 ,陈红英 ,崔 　沛 ,贾艳艳 ,崔保安 ,方剑玉 ,王振亚 ( 1 河南农业大学 牧医工程学院 ,河南 郑州 450002 ;2 河南省动物疫病预防控制中心 ,河南 郑州 450008 ; 3 南京农业大学 动物医学院 ,江苏 南京 2 10095) [摘 　要] 　【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素2 (p IL 2) ,并鉴定其生物学活性 。【方法】以含猪 IL2 基因 的重组质粒 p GEMp IL 2 为模板 ,PCR 扩增 IL2 基因。将猪 IL2 基因定向克隆到原核表达载体 p GEX6p1 中 ,转化 ( ) ( ) 大肠杆菌 Esche richi a col i BL 2 1 D E3 感受态细胞 ,在 IP T G 诱导下表达融合蛋白 GSTp IL 2 ,并应用甲基噻唑基四 ( ) 唑 M T T 试验测定融合蛋白的生物学活性 。【结果】以含有猪 IL2 基因的重组质粒 p GEMp IL 2 为模板 , PCR 扩增 出 1 条约 420 bp 的带 。所获重组质粒 p GEXp IL 2 经酶切 、测序鉴定 ,证实含有 目的片段 ,且连接 、构建正确 。SD S PA GE 电泳结果显示 ,可检测到相对分子质量约为 42 ku 的 GSTp IL 2 ,West ernblot 证实 GSTp IL 2 能与兔抗猪 IL2 单克隆抗体发生特异性反应 。表达蛋白经薄层层析扫描分析 ,表达量约占菌体总蛋白的40 % 。M T T 试验证实 ,表达 产物经变性 、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖 。【结论】猪 IL2 基因在大肠杆菌中得到表达 ,表达的蛋白具有一 定的生物学活性 。 [ 关键词] 　猪白细胞介素2 ;原核表达 ;生物学活性 [ 中图分类号] 　S85 1. 3 1 [文献标识码] 　A [文章编号] 　167 19387 (2009) 11000 106 Exp re ssion of huainan porcine int erleukin2 in Escherichi a coli and bio activity analy si s GU O Xiaocan1 ,C H EN Hongying1 ,CU I Pei2 ,J IA Yanyan1 ,CU I Baoan1 , FAN G J ianyu3