4HPLC图谱异常分析.ppt

HPLC常见问题及解决方案 Leo.xu 一、基线漂移 柱温波动，采用柱温控制设备既可解决。 流动相不均匀：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。使用前进行脱气。 流通池被污染或有气体：用异丙醇冲洗流通池，必要时用1N 硝酸。 检测器出口阻塞：参考检测器手册更换流通池窗。 流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速。 柱平衡慢：用中等强度的溶液进行冲洗（如异丙醇），更换流动相时，用10-20倍柱体积的新流动相对柱子进行冲洗。 检测器未设下在最大吸收波长长：调整波长。 二、基线噪音（规则的） 在流动相、检测器中或泵中有空气：流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 漏液：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封圈。 流动相混合不完全：混合均匀。 温度影响（柱温过高，检测器未加热）：减少差异或加上热交换器。 泵振动：在系统中加入脉冲阻尼器。 三、基线噪音（不规则的） 漏液：同上。 流动相污染、变质或由低质溶剂配成：更换。 流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。 检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。 检测器灯能量不足：更换灯。 能谱柱填料流失或阻塞：更换色谱柱。 流动相混合不均匀或混合器工作不正常：维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置。 四、宽峰 流动相组成变化：重新配置新的流动相。 流动相流速太低：调节至合适的流速。 漏液：同前。 检测器设定不正确：调整设定。 柱子过载：减少进样量或是稀释样品后再进样。 柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大：使用内径为 0.007-0.01的管路。 缓冲液浓度太低：增加浓度。 保护柱污染或失效：更换保护柱。 色谱柱污染或失效， ，塔板数较代：更换色谱柱。 四、峰宽 柱入口塌陷：打开柱入口，填补塌陷或更换柱子。 呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰：选择其它类型的色谱柱以改善分离效果。 柱温过低：提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃ 。 检测器时间常数太大：使用较小的时间常数。 五、分离度降低 流动相污染或变质（引起保留时间变化）：重新配置新流动相。 保护柱或分析柱阻塞：去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在，色谱柱可能被强保留物质损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。 六、所有的峰面积都太小 检测器衰减设定过高：减少衰减的设定。 检测器时间常数设定太大：设定较小的时间常数。 进样量太少：增大进样量。 记录仪连接不录：使用正确的连接。 七、峰拖尾 筛板阻塞：反冲色谱柱，更换进口筛板，更换色谱柱。 色谱柱塌陷：填充色谱柱。 干扰峰：使用更长的色谱柱，改变流动相或更换色谱柱。 流动相pH选择错误：调整pH值，对于碱性化合物，低pH值更有利于得到对称峰。 样品与填料表面的溶化点发生反应：加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂，更换色谱柱。 八、峰前延 柱温太低：升高柱温。 样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂。 样品过载：降低样品含量。 色谱柱损坏：同上。 九、峰分叉 保护柱或分析柱污染：去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在，色谱柱可能被强保留物质损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。 样品溶剂不溶于流动相：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。 十、峰变形 样品过载：减少进样量或将样品稀释后再进样。 十一、早出的峰变形 样品溶剂选择不当：减少进样体积，运用低级性样品溶剂。 十二、酸性或碱性化合物的峰拖尾 缓冲不合适 使用浓度为50-100mM的缓冲液。 使用pH值等于流动相pH值的缓冲液。 十三、额外的峰 样品中有其他组份：正常。 前一次进样的洗脱峰：增加运行的时间或梯度的斜率，提高流速。 空位或鬼峰：检查流动相是否纯净，使用流动相作为样品溶剂，减少进样体积。 十四、保留时间波动 温控不当：调整好柱温。 流动相组分变化：防止变化（蒸发、反应等）。 色谱柱没有平衡：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。 十五、保留时间不断变化 流速变化：重新设定流速。 泵中有气泡：从泵中除去气泡。 流动相选择不当：更换合适的流动相，选择合适的混合流动相。