FISH技术在血液肿瘤中的应用.pptVIP

鉴别诊断，以BCR/ABL探针为例： 额外信号的BCR/ABL探针（ES） 根据荧光信号的模式不同，可以鉴别MBCR断裂点（P210）和mBCR断裂点(P190)。 MBCR断裂点的细胞呈现1Y/2R/1G的信号模式，而mBCR断裂点的细胞则是2Y/1R/1G的信号模式。 一、鉴别诊断 一、鉴别诊断 双色双融合信号探针（DF）—虽不能区分MBCR和mBCR，但能检测der（9）的部分序列缺失。 ABL和BCR基因同时缺失：1R/1G/1Y ABL基因单独缺失： 1R/2G/1Y 。 ES探针却无法检测der（9）的部分序列缺失，其信号均显示1R/1G/1Y 。 一、鉴别诊断 IgH-CCND1 男性，54岁患者，左颌下肿块2月余 白细胞增高（21.3×109/L） 骨髓涂片见到增生活跃，以成熟淋巴细胞增生为主，考虑慢性淋巴细胞白血病。 流式分析显示CD5+CD19+细胞占86.5%，以CD19+的细胞群设门，CD23+细胞约占16.3%。 FISH检测患者外周血，约50%的圆形细胞显示融合信号，提示套细胞淋巴瘤可能性大。 病理证实了左颌下淋巴结非霍奇金套细胞淋巴瘤。。  CLL中的应用 CLL的细胞大多处于间期，有丝分裂活性较低，细胞往往不分裂，即使分裂的细胞绝大多也是正常核型，核型分析的异常检出率很低。 CLL的遗传学异常被认为与存活期有关： 正常核型和13q-预后相近 +12、11q-和17p-的预后均较差 二、治疗和预后分层 FISH共检出了23例异常（76.7%）。 完成核型分析的18例中仅2例检出异常。 正常核型的9例中，FISH检出7例异常。 未见分裂象的7例中，FISH检出5例异常。 而且这些由FISH检出的异常克隆比例基本都在20%以上。 CEP12 P53 D13S25 RB1 ATM 核 型 阳性例数 11 2 13 12 1 异常2 正常9 未见7 未做12 二、治疗和预后分层 MM中的应用 MM的骨髓瘤细胞有丝分裂指数低，且由于骨髓浸润程度不同，常规核型分析异常检出率相对较低，检出的异常往往是超二倍体和/或复杂核型。 MM的遗传学异常同样被认为与预后相关，13q14的缺失被认为是复发和预后不良的独立危险因素，1q21扩增、p53缺失也都提示预后不良。 二、治疗和预后分层 二、治疗和预后分层 FISH共检出了17例异常（56.7%）。 完成核型分析的27例中6例检出异常（22.2%）。 正常核型的15例中，FISH检出9例异常。 未见分裂象的7例中，FISH检出3例异常。 FISH检出的异常克隆比例大多都低于30%。 浆细胞比例低于20%，异常检出率会大大降低。 1q21 P53 D13S319 RB1 IgH 核 型 阳性例数 6 2 8 7 10 异常6 正常15 未见6 未做3 MDS中的应用 FISH在MDS中的应用价值相对较低。 MDS的患者大多能成功完成核型分析，且被分析的分裂象数目和质量尚可。 FISH检测普遍采用组合探针（-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-和-Y）对五大类常见异常进行分析。 二、治疗和预后分层 在我院新近完成的70例MDS患者的研究中： 核型和FISH分别检出21例和22例异常，异常检出率相当。 核型异常但FISH正常的6例，这6例异常均发生于探针覆盖范围以外区域。 核型正常而FISH异常7例，这7例的异常克隆细胞比例大多较低（10%）。 对于未见分裂像和正常核型的患者有一定的应用价值，能提高小克隆异常的检出率。 二、治疗和预后分层 三、监测疗效 对于某些不具有特定分子水平改变，或者是基因重排方式比较特殊，常规的分子生物学方法不能检测，但其在疾病初发时有较大片段的易位、缺失、扩增或重排并能被现有的FISH探针检出的患者，可在治疗后进行FISH监测。 FISH在异性别异基因造血干细胞移植后供受者嵌合比例的监测中也有非常重要的价值。 比较未分选细胞的STR和FISH两种技术，FISH的敏感性和准确度更高，对于早期提示复发或排斥反应的临床应用价值更大。 四、识别移植后骨髓细胞来源 小 结 FISH的优点： 简便迅速。 杂交和检测效率高。 敏感性和特异性高，能对间期细胞进行分析。 缺点包括： 价格相对较高。 受探针来源的限制。 检测三体敏感性高于单体或缺失。 石蜡包埋或冰冻切片较难处理。 需荧光显微镜和分析系统。 一次杂交只能检测1至数个异常。 小 结 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital Welcome to ShanghaiWelcome to our hospital 上海市第一人民医院 Shanghai First People’s Hospital 上海市第一人民医