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MLPA原理要点
MLPA技术原理
MLPA 多重连接依赖探针扩增技术 （multiplex ligation-dependent probe amplification）
MLPA技术最早由荷兰学者Dr.Schouten JP于2002年提出, 是近几年发展起来的一种针对待检DNA序列进行定性和半定量分析的新技术。MLPA可以快速同时鉴定几十个基因的缺失和插入，可用于血液，肿瘤样本的DNA，mRNA的表达谱分析。而且，MLPA方法可用于甲基化分析。该技术具有高效、特异性，可在同一反应管内检测多达50个核苷酸序列的拷贝数变化。
MLPA目前的应用领域：
1.检测小的重排
2.检测大范围的染色体重排
3.检测亚端粒区的拷贝数改变。
4.检测染色体非整倍体改变。 5.肿瘤诊断
6.甲基化定量检测
7.mRNA分析细胞凋亡和炎症反应。
样本DNA变性
探针与靶序列杂交
探针特异化连接
连接探针的扩增
结果的检测分析
MLPA实验流程图
一.样本DNA变性
1.提取样本DNA。
2.DNA溶解后，冷却至室温，进行纯度及浓度检测。
二.探针与靶序列杂交
针对每个待测基因目标序列设计了一对探针，这一对探针包括一条经化学合成的短探针（5‘ 端探针）和一条经M13 噬菌体衍生法制备而来的长探针（3’ 端探针）组成。
短探针长约50-60bp，长探针长约60-450bp。
填充序列：长度特异填充片段，由于填充片段长短不一而可以区分不同的探针。
三.探针特异化连接
连接后探针长度在130nt-480nt之间，相邻两探针相差6-9nt。
MLPA技术的特色是：1.仅扩增连接完好的探针，而不是扩增样本
靶序列。
2.在一个反应体系中，所有连接探针的PCR
扩增用的是同一对引物。
四.连接探针的扩增
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