PCR发展、原理 简版要点.ppt

分子生物在生活及医学中的应用 DNA分子的结构 PCR的发展史 PCR的原理、试剂检测原理 常见实时荧光PCR仪器 日常生活中 转基因食品 亲自鉴定 酱油、醋、酒的酿造 医学领域 疾病基因检测 / 遗传病的产前诊断 致病病原体的检测 肿瘤治疗中癌基因的检测 DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别、法医物证 其他: 动、植物检疫（转基因动植物检测） 分子生物在生活及医学中的应用 DNA分子的结构 PCR的发展史 PCR的原理、试剂检测原理 常见实时荧光PCR仪器 分子生物在生活及医学中的应用 DNA分子的结构 PCR的发展史 PCR的原理、试剂检测原理 常见实时荧光PCR仪器 很少有在公司工作的科研人员得诺贝尔奖， Mullis是其中之一 PCR的发展史 1983年春，Mullis发展出PCR的概念； 1983年9月，Mullis用大肠杆菌DNA聚合酶做了第一个PCR实验，只用一个循环； 1985年12月20日，Mullis的同事Saiki在Science上发了一篇论文，方法中用了PCR技术，导致Mullis的文章到处被拒； 1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202 ），这回Mullis是第一发明人。 1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法； 1986年6月，Cetus公司纯化了第一种高温菌DNA聚合酶，Taq DNA polymerase，这是85年春天Mullis建议做的； 1988年，第一台PCR仪问世； 1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖 分子生物在生活及医学中的应用 DNA分子的结构 PCR的发展史 PCR的原理、试剂检测原理 常见实时荧光PCR仪器 什么是PCR？ PCR：又叫做聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制 PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。 试剂检测原理 实时荧光PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。 如何检测荧光强度呢, 我们先来了解一下荧光探针。 分子生物在生活及医学中的应用 DNA分子的结构 PCR的发展史 PCR的原理、试剂 检测原理 常见实时荧光PCR仪器 实时荧光PCR仪 实时荧光PCR仪 实时荧光PCR仪 实时荧光PCR仪 实时荧光PCR仪 ABI 7500荧光定量PCR仪 96孔、4通道 BIO-Rad CFX 96 96孔、4通道 实时荧光PCR仪 罗氏LC 480 96孔、4通道 刘洋 中关村DNA双螺旋结构“生命”雕塑，如今已被看做中关村的标志，收到各界好评。 A G C T 一. DNA—脱氧核糖核酸 1’ 2’ 3’ 4’ 含Ｎ碱基 脱氧 核糖 磷酸 5’ 2、化学元素组成： C H O N P 脱氧核糖核苷酸 1、基本单位： 3、脱氧核糖核苷酸： 一分子五碳糖、一分子 磷酸基团和一分子含N碱基 腺嘌呤脱氧核苷酸 鸟嘌呤脱氧核苷酸 胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸 A 脱氧 核糖 磷酸 G 脱氧 核糖 磷酸 C 脱氧 核糖 磷酸 T 脱氧 核糖 磷酸 脱氧核苷酸的种类（四种） A G C T 氢键 A T G C 平面结构 立体结构 DNA分子的空间结构模型 碱基对 另一碱基对 嘌呤和嘧啶之间通过氢键配对，形成碱基对，且A只和T配对、C只和G配对，这种碱基之间的一一对应的关系就叫做碱基互补配对原则。 A T G C 氢键 碱基与氢键的关系 A A T T G G G G C C C A T C （1）DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链盘旋成双螺旋结构。 DNA分子的结构特点 A A T T G G G G C C C A T C （1）DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链盘旋成双螺旋结构。 （2）DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替连接，排列在外侧，构成基本骨架；碱基在内侧。 DNA分子的结构特点 A A T T G G G G C C C A T C （1）DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链盘旋成双螺旋结构。 （2）DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替连接，排列在外侧，构成基本骨架；碱基在内侧。 （3）两条链上的碱基通过氢键连结起来，形成碱基对，且遵循碱基互补配对原则。 DNA分子的结构特点 PCR技术简史