生物分离工程第八章沉析.pptVIP

In this type of precipitation, a metal ion will bind to a part of the protein. An advantage of this type of precipitation is that they have great precipitating power in a dilute solution. These ions can be classified into three groups. Ions such as Mn2+, Fe2+, Co2+, Ni2+, Zn2+, and Cd2+ will bind strongly to carboxylic acids and to nitrogenous compounds. Ca2+, Ba2+, Mg2+, and Pb2+ will mainly bind to carboxylic acids. Finally, Ag+, Hg2+, and Pb 2+ will bind strongly to sulphydryl groups. 金属离子沉析 离子型表面活性剂 十六烷基三甲基季铵盐的溴化物（CTAB） 主要用于沉淀酸性多糖 十二烷基硫酸钠（SDS） 主要用于沉淀膜蛋白和核蛋白 离子型多聚物沉析剂 是一类温和的沉析剂，与目标蛋白成盐。 核酸（多聚阴离子），用于碱性蛋白的沉淀； 鱼精蛋白（多聚阳离子），用于酸性蛋白的沉淀； 粘多糖沉淀剂 CTAB(十六烷基三甲基季铵盐溴化物) 与多糖上的阴离子形成形成季铵络合物，降低离子强度，络合物析出。 分离核酸用沉析剂 酚、氯仿、十二烷基磺酸钠等 目的是使核酸和蛋白质分离，蛋白质变性沉淀，核酸则存在于水溶液中。 选择性变性沉淀法 利用蛋白质、酶、核酸等生物大分子对某种物理或化学因素的敏感性差异，实现分离。 加入变性剂 选择性热变性 选择性酸碱变性 使用时需慎重！！！！ 亲和沉析 原理：利用蛋白质和特定分子（配基、基质、辅酶等）之间高度专一而设计的一种特殊选择性的分离技术，所以沉淀原理不是依据蛋白质溶解度的差异，是因为蛋白质与特定分子结合，形成固相从而与杂质分离 分类：根据亲和沉淀的机理，分为一次作用亲和沉淀（水溶性分子偶联2个或2个以上的亲和配基，双配基和多配基可与含有2个以上的亲和结合部位的多价蛋白质交联，进而产生较大的交联网络而沉淀）和二次作用亲和沉淀（先使目标物质和带有配基（基质、辅酶）的载体结合，然后改变pH或其它条件使目标物-配基-载体形成可逆性沉淀，从而使目标物与杂质分离(CE p356)。 沉析技术的应用 蛋白质 多糖 皂苷 杜仲中绿原酸的提取 水提醇沉法（水醇法）系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达不同含醇量，某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。一般操作过程是：将中药水提液浓缩至1︰1-1︰2（mL︰g），药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24-48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。操作时应注意以下问题：①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％-60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。 水提醇沉法与醇提水沉法 醇提水沉法（醇水法）系指先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，将提取液回收乙醇后，加适量水搅匀，静置冷藏一定时间，沉淀完全后滤除的方法。药材用乙醇为溶剂提取，可避免淀粉、蛋白质、黏液质等成分的浸出，加水处理后可除去醇提液中树脂、脂溶性色素等杂质。应用此方法要慎重，避免醇溶性有效成分因水溶性差而被一起沉淀除去。 本章作业 P63课后思考题1、2、3及： 1、常用的蛋白质沉淀方法有哪些？ 2、简述盐析的原理。 3、影响盐析的主要因素有哪些？ 4、简述有机溶剂沉析的原理。 5、简述等电点沉析的原理。 Chapter 8沉 析Precipitation Precipitation什么是沉析？ Precipitation method is used to purify the proteins沉析法纯化蛋白质的优点有哪些？ The operation procedures of precipitation沉析的一般操作步骤是什么？ Salt induced p