植物检疫学植物检疫性细菌病害.ppt

第六章检疫性细菌病害 植物病原细菌检疫检验技术 直接检测：直观检验和生长检验 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测 1、活菌检测 分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴别培养基分离纯化得到的细菌 浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感病植物，观测发病情况。 例如：浙江大学等在1％灭菌水琼脂中加75×10－6的苯并咪唑，做平板，加感病植物叶片，针刺＋摩擦接种，培养（光、温、湿度），短期获得症状。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。 2.免疫吸附分离法 原理：接合血清学与平板分离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。 方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法 平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下： 3.噬菌体检验 原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞，在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变清，在固体平板上培养，则出现许多边缘整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类。 4.非活菌检测 非活菌检测的方法很多，下表是检测病原细菌常用的一些方法，前9种血清学方法，均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定，又能直接用于病种或病株，甚至是无症感染组织的检测。 5.血清学检验 原理： 方法：酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫荧光抗体法 免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧光黄或罗丹明）与抗体以化学方法接合，再与抗体反应，形成有荧光标记的抗体—抗原复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色荧光。 梨火疫病Fire blight of pear 分布： 梨火疫病的地理分布 寄主： 梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹果、山楂、木旬子、李等４０多个属220多种植物，大部分属蔷薇科Pomoideae亚科。 危害性： 仁果类果树的一种毁灭性病害。一棵多年生的梨和苹果树发病后可在几星期内死亡 症状：侵害花、果实、枝条和叶片。 花:侵染后变深褐色，枯萎。 叶片:从叶缘沿叶脉扩展，先呈水浸状，后黑褐色。 嫩稍:先水浸状，后褐色至黑色，向下弯曲，呈鱼钩状。 果实：病部褐色凹陷，扩展到全果，潮湿时病部生粘稠的细菌溢，初乳白色，后红褐色。 病枝:叶片凋萎，幼果僵化，但病叶病果不脱落，远望似火烧状，故称火疫病。 伤口：初期水浸状，后下陷，呈溃疡斑，病健交界处产生龟裂纹，韧皮部红褐色，有黏液状菌脓。 严重时，病害从嫩稍很快扩展到枝条、主干，直至根部，全株死亡。 主要鉴定特征： 梨火疫病最典型的症状是花、果实和叶片受火疫病菌侵害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一般，但仍挂在树上不落，故此得名。目前国际上将其症状据受侵害的部位，分成５个阶段。 （2）溃疡枯萎：是指前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现褐色条斑，随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。这些枝条特别是嫩枝与下面谈及的枝枯萎有明显区别，即在萎蔫之前枝尖芽褪色（黄至桔黄色）。 （4）病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。 （5）损伤枯萎和砧木枯萎：这二种比较特殊，前者主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实 很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL-26、 EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接穗在这些砧木上发病后引起，最终成溃疡带而杀死树体。 病原菌： 学名：Erwinia amylovora（Burrill）Winslow 异名： Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovorus (Burrill) Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill) Chester 分类地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌门(Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)欧文氏菌属(Erwinia)解淀粉欧文氏菌 形态特征：直杆菌，有荚膜，周生鞭毛，能运动，大小为0.9-1.8× 0.6-1.5μm，多数单生，有时成双或短时间内3-4个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗糖培养基上27℃下培养3d，菌落直径3～4mm，白色至奶油色，半球形隆起，有黏性，