第二章(1、2)植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作.ppt

第二章 植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作 第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术 一、植物组织培养实验室的结构及设计要求 二、 实验室基本操作 微量元素中，铁的用量较大，它对叶绿素的合成起重要作用，由于在较高pH下，FeCl3极易形成Fe（OH）3沉淀，难以被吸收，所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与硫酸亚铁形成的螯合物，并且单独配制。 （二）有机成分： 主要包括各种维生素和氨基酸 常用的维生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇（VB6）、烟酸（VB3）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶酸等。 常用的氨基酸：甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。 有时添加水解乳蛋白或水解酪蛋白，为牛乳经酶法加工的水解产物，含有20种氨基酸的混合物，用量10－1000mg/L, 通常用于原生质体等培养。 此外肌醇是另外一种重要的有机成分，在维持离子平衡，糖类的转化中起重要作用，此外还参与磷脂代谢及等生理作用。它可以促进愈伤组织的形成，不定芽、不定胚的分化。 （三）植物生长调节物质： 植物激素是植物代谢中产生的天然化合物，它能直接影响植物细胞的分化、分裂以及影响植物的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌发等生理活动。 在植物组织培养中，主要通过植物激素及生长调节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚胎发生等。 常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物激素： 1、生长素类： 2、细胞分裂类： 3、赤霉素类： 4、脱落酸： 5、多胺 6、乙烯： 1、生长素类： 组织培养中的功能是：促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根。 常用的有NAA、IAA、IBA、2,4－D等。 2、细胞分裂素类： 功能：诱导芽的分化、促进侧芽萌发；促进细胞分裂和扩大，促进茎增粗，抑制茎伸长；延缓衰老。 常用细胞分裂素有BA、KT、ZT、2ip等。 此外近年来发现苯基脲衍生物具有非常高的细胞分裂素活性，在多种植物上应用。 如TDZ，CPPU，4－PU等。 3、赤霉素类： 主要具有诱导茎的细胞伸长，对根无效；对形成层细胞分化有影响，与生长素协同作用；可以诱导离体成花；打破休眠等功能。 常用GA3、GA4等。 4、脱落酸（ABA）： 促进休眠、衰老和脱落。组织培养中较少使用，主要用于种质资源的离体保存。 5、乙烯： 主要促进衰老和脱落，高浓度易形态变化。 （四）碳源： 碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架，为细胞的呼吸代谢提供底物与能源，此外还能维持一定的渗透压。 常用的碳源主要是蔗糖，使用浓度在10－50g/L，此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。 * 第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作 一、植物组织培养实验室的结构及设计要求： 完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。 但从功能上至少包括准备室（化学实验室）、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。 在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。 第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术 （一）准备室（化学实验室）： 1. 主要功能： 用于培养器皿的清洗、干燥、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。 2. 主要仪器设备及用品： 药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）、蒸馏水制造装置。 天平、移液器、 pH计、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、及培养基分装用品等、高压灭菌锅、 冰箱。 （二）接种室（无菌操作室）： 1、功能： 接种材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。 接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。 2、仪器设备及用品： 超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。 （三）培养室： 1、功能： 主要用于植物材料的培养。 要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度，以促进植物材料的生长和分化。 2、仪器设备及用品： 培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱等。 （四）细胞学实验室： 1、功能： 主要用于培养材料的显微观察及照相等。 2