TALENs介导的Nanog基因表达下调对宫颈癌HeLa细胞恶性行为的影响.pdf

四川 大 学 学 医 学 版 2016 JSichuanUniv，MedSciEdi) ；4_7(、1)：●2●-3●—_2-7- TALENs介导的Nanog基 因表达下调对宫颈癌 HeLa细胞恶性行为的影响 于爱清 ，李成林 ，杨 毅 ，严世荣 。△ L武汉大学中南医院 基 因诊断中心 (武汉 430000) 2．湖北医药学院附属太和医院 胚胎干细胞研究湖北重点实验室 (十堰 442000) 3．湖北医药学院 生化教研室 (十堰 442000) 【摘要】 目的 研究 Nanog表达下调对宫颈癌 HeIa细胞恶性行为的影响。方法 通过基 因编辑工具转录 激活样效应器核酸酶(TAIENs)介导Nanog下调表达 ，基因测序分析 Nanog的突变情况 ；挑取单个细胞培养 以筛 选 出Nanog明显下调表达的单克隆HeLa细胞 ；RT—PCR检测 mRNA表达水平 ；Westernblot检测蛋白表达水平 ； HeLa细胞的集落形成能力、侵袭性及耐药性分别通过集落形成实验、Transwell侵袭实验及药物敏感性实验检 测 。结果 TALENs成功介导Nanog基因突变并导致其下调表达 ，Nanog突变的单克隆HeLa细胞 NanogmRNA 和蛋白表达水平较野生型 HeLa细胞均下调表达 (P0．05)。Nanog突变单克隆 HeLa细胞相对于野生型 HeLa 细胞表现出明显减弱的侵袭、集落形成及化疗药物抵抗能力 (P0．05)。结论 Nanog突变减弱 HeLa细胞 的恶性 行为，下调或沉默 Nanog表达有望成为一种新型的治疗宫颈癌策略。 【关键词】 TALENs Nanog HeLa细胞 宫颈癌 TheEffectofTALENs-mediatedDownregulationExpression ofNanogonM alignantBehaviorofCervicalCancerHeLa Cells YU Ai—qing ．LICheng—lin。，YANG-Yi，YAN Shi—rong’ ．1．CenterforGeneDiagnosis，Zhongnan HospitalofWuhanUniversity，Wuhan430000，China；2．HubeiKeyLaboratoryofEmbryonicStem Cell Research，TaiheHospital，theAffiliatedHospitalofHubeiUniversityofMedicine，Shiyan442000，China；3． DepartmentofBiochemistry，HubeiUniversityofMedicine，Shiyan442000，China △ Correspondingauthor，E-mail：graceyan@ 163．com [Abstract] Objective TostudytheeffectofdownregulationexpressionofNanogonmalignantbehaviorof cervicalcancerHeLacells．Methods GeneeditingtoolTALENswasemployedtOinducedownregulationexpression ofNanog，andNanogmutationwasevaluated by sequencing．RT—PCR andW estern blotwasused tOdetectthe mRNA and protein expression level， respectively． Colony-formation assay， Transwellinvasion assay， and chemotherapy sensibility assay was carried OUt to assess the capacity of colony—formation， invasion， and ehemoresistance，respectiv