实验一 细胞的形态观察与其大小测量.doc

实验一 细胞的形态观察及其大小测量 【实验目的】 1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构； 2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。 【实验用品】 普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。 【实验材料】 人肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。 【实验内容和方法】 (一)细胞形态观察 l、动物细胞的观察 （1）鼠肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。 （2）鸡血细胞涂片的观察：注意观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。 2、植物细胞的观察 （1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。 （2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。在显微镜下观察的形态和结构。 （二）细胞的大小和测量 1、测微尺的使用 目镜测微尺是一块圆形玻片，中心刻有一尺，长5～10mm，分成50～100格。每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树胶封固一圆形的测微尺，长1mm或2mm，分成100格或200格，每格的实际长度0.01mm(10μm)。当用目镜测微尺来测量细胞的大小时，必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。方法如下： (1)卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。 (2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。 (3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。 (4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm： 0 1 2 3 测定目镜测微尺每格实长的图解 上尺：目镜测微尺；下尺：镜台测微尺 镜台测微尺的格数 目镜测微尺每格的微米数= —————————×10 目镜测微尺的格数 例如，图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格，代入公式得： 目镜测微尺每格=1／6×10μm=1.66μm (5)取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺测量标本。 2、计算：根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。 椭球形：V=4πab2／3 a-长半径 b-短半径 圆球形：V=4／3πr3 r-半径 圆柱形：V=πr2h r-半径 h-高 【作业与思考】 1、血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。绘图。 2、任意选择你所看到的动物细胞和植物细胞各一个，绘图并进行适当标注，测量其大小，并比较动植物细胞大小的差异。 3、在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小一致吗？你认为在哪个放大倍数下测定得比较准确？为什么？ 实验二 PEG法诱导细胞融合 【实验目的】 1. 了解细胞融合的原理和过程； 2. 初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。 【实验原理】 细胞融合，即在自然条件下或利用人工法 (生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。由于不仅同种细胞可以融合，种间远缘细胞也能融合，甚至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域，并且取得显著的成绩。使细胞发生融合PEG分子量，浓度及作用时间是PEG融合技术的关键。该方法的优点是：简单，容易获得融合体，融合效果好。细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。 1.77g Na2HPO4.2H2O，0.69g NaH2PO4.2H2O，2.0 g葡萄糖，0.01g 酚红，溶于1000m重蒸水中。0.85%生理盐水；1%柠檬酸钠溶液；2%柠檬酸钠溶液；0.4%KCl溶液（0.075M） 4）0.0667mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） A液：1000ml含Na2HPO4 9.465 g或 Na2HPO4·2H2O 11.876g 或Na2HPO4·12H2O23.88g B液：1000ml含KH2PO4 9.07g 取A液80ml+B液20ml混匀成pH7.4磷