医学微生物学实验形态学检查.ppt

医学微生物学实验细菌的形态和结构观察 医学微生物学实验室规则 1.学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒。 2.实验无关物品一律禁止带入实验室。 3.严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。 4.手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。 5.实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。 一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识 （一）光学显微镜（油镜）放大观察细菌 1、显微镜（油镜头的识别标志） （物镜）镜头刻有100×/ 或 “OIL”字样 2、油镜观察标本的步骤 （1）采光，（2）载玻片上滴加一滴香柏油，（3）调焦，使油镜头浸于玻片上的油中，由于玻璃和其折光率近似，由集光器出来的光线通过玻片和此油时基本不发生折射而直接进入镜筒，使物像清晰。（4）油镜使用完毕，应用擦镜纸擦去镜头上的香柏油。 总之：油镜使用减少了光线的折射，而使镜筒集聚了更强的光线，故人们观察物像更清晰 （二）细菌的基本形态和结构观察 1、实验教学过程中，认真记录结果，并如实作出实验分析。 2、争取当堂完成实验报告（用彩色笔画图、完成填空并回答简答题）。 (一)基本形态1）葡萄球菌 G+ 球形，直径约1μm，呈葡萄串状排列； 无鞭毛和芽孢、一般不形成荚膜； (一)基本形态2）链球菌 直径约1μm。链状排列。无鞭毛，不形成芽胞。 (一)基本形态3）脑膜炎球菌 革兰染色阴性，0.6-0.8μm 肾形、成双排列，凹面相对； 多位于中性粒细胞内； (一)基本形态4）大肠杆菌 (一)基本形态5）炭疽芽胞杆菌 最大的G+粗大杆菌 两端平切，竹节样排列 有芽胞，呈椭圆形，位于菌体中央 (一)基本形态6）霍乱弧菌 （二）特殊构造 7）芽孢：破伤风梭菌 （二）特殊构造 9）鞭毛：伤寒沙门菌 抗酸染色 细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性 三、细菌涂片标本制作和革兰染色法 操作步骤一）、细菌涂片标本制作 1、涂片 2、干燥 3、固定 二）、革兰染色法 1、革兰染色法（Gram stain）用途 鉴别细菌 选择抗菌药物 研究细菌致病性 三、步骤与方法 1.涂片制备 涂片 干燥 固定 2.染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色（乙醇） 复染（石炭酸复红） 1min 吸水纸吸干 3.镜检：油镜下观察。 　　　　　注 意 事 项 1. 涂片的厚度； 2. 固定的程度； 3. 染色的时间控制，一一半半； 4. 冲洗的方法，不要对着涂片区； 5. 油镜头的使用方法。 画图作业及记结果： 作业 （一）细菌的基本形态：绘图作业（6个视野） （二）细菌的特殊结构绘图作业（3个视野） （三）革兰染色法原理、材料、方法、结果、分析。 一、观察并完成绘图作业（9个视野） 作业 作业（二）、记结果： （二）、记结果： 大肠杆菌呈 色 性；记G- 葡萄球菌呈 色 性； 记G+ * * * 内 容 1.实验室生物安全； “有菌意识，无菌操作观念”的树立。 2、学会显微镜油镜的使用。 3、学会辨认细菌的基本形态和特殊结构。 4、初步学会制作细菌涂片、革兰染色法的操作及结果判断。 （一）显微镜油镜的使用 电镜图 电镜图 光镜图 G-杆菌 0.6-1.0μm* 2-4μm 周身鞭毛 G-菌，菌体短小， 弯曲成弧形，单鞭毛。 电镜图 光镜图 G+,菌体细长，芽胞正圆， 位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状. （二）特殊构造 8）肺炎链球菌 形态与染色： 革兰染色阳性，双球菌，矛头状，钝端相对； 无芽胞和鞭毛，有厚荚膜； G-杆菌 0.6-1.0μm *2-4μm 周身鞭毛 白 大 1min 1min 1min 水冲 水冲 水冲 水冲 四、结果 G- G+ 1）葡萄球菌 2）链球菌 3）脑膜炎球菌 4）大肠杆菌 5）分枝杆菌 6）霍乱弧菌 7）芽孢： 破伤风梭菌 8）荚膜： 肺炎链球菌 9）鞭毛： 伤寒沙门菌