TG1电击感受态细胞使用说明.pdfVIP

TG1 电击感受态细胞 TG1 Electroporation Competent Cell 编号 名称 规格 北京华越洋 WG 1220 TG1 电击感受态细胞 10 ×100ul TG1 电击感受态细胞基因型： q – – [F´ traD36 proAB lacI ZΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5(rK mK ) TG1 电击感受态细胞说明： TG1 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。TG1 来源于E. coli K-12 菌株， 是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株，在平板上37℃，7 h 可见克隆。主要的噬菌体 展示用菌株，同时也可用于普通质粒的构建，lacIqZΔM15 的存在使其可以用于蓝白斑筛选 等实验；但不含核酸酶endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时推荐使用质粒提取试 剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。TG1 电击感受态细胞适用于噬菌体展示文库的 构建，经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率0.5×1010 cfu/μg DNA。 TG1 电击感受态细胞操作方法： 1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5 分钟，待其沥干水分，正 置5 分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置5 分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的TG1 电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒 或连接产物) 并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl 感受态。 3. 用200 μl 枪头(用刀切除0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产 生气泡，盖上杯盖。 4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐 参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入 冰中。 5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 1ml 不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温）， 用 1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心 管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至 10 ml。倾斜45 度放入摇床，37℃，225 rpm 复苏60 分钟。 6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的S.O.C 平板上 （因菌量较大，若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿2-5 个）。将平板倒置放于37℃培养箱 过夜培养 13-17 小时。 TG1 电击感受态细胞注意事项： 1. 加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。 2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3. 当DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放 电的风险。 5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大 一倍，转化效率下降一个数量级。 6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA 后用适量TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过 大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜， 降