第三章病毒和亚病毒.ppt

第一节 病毒的特征 一、病毒的形态构造和化学成分 二、病毒及其繁殖方式 三、群体形态 四、病毒的一步生长曲线 五、溶源性 电子显微镜法(利用负染法) 二十面体对称的代表-腺病毒(Adenovirus) 包膜 包膜：覆盖在核衣壳外的一层含蛋白质或糖蛋白的类脂双层膜。 （四）病毒的核酸 DNA,RNA之分 噬菌体（bacteriophage） 噬细菌体、噬放线菌体、噬蓝细菌体 A型，dsDNA，蝌蚪状，收缩性尾 B型，dsDNA，蝌蚪状，非收缩性长尾 C型，dsDNA，蝌蚪状，非收缩性短尾 D型，ssDNA，球状，无尾，大顶衣壳粒 E型，ssRNA，球状，无尾，小顶衣壳粒 F型，ssDNA，丝状，无关尾 三.四类病毒及其繁殖方式 烈性噬菌体(virulent phage) ：感染细菌后能迅速引起寄主裂解释放子代噬菌体的噬菌体。 过程包括五个步骤——吸附、侵入、增殖、成熟（装配）和释放（裂解）。称为裂解性周期或增殖性周期。反之则称为温和噬菌体（temperate phage） 特点： 无个体生长过程，只有两种基本成分的合成和装配。 病毒的群体形态 包涵体（inclusion body)：指大量病毒聚集并使宿主细胞发生病变时，形成了具有一定形态、构造并能用光镜加以观察的特殊“群体”，即包涵体。 噬菌斑（plaque）：噬菌体在菌苔上形成的“负菌落”。 枯斑（lesion）：植物病毒在植物叶片上形成的群体形态 包涵体（inclusion body） 枯斑 噬菌体效价的测定 噬菌斑概念 噬菌斑作用：类似于菌落，可用于纯种分离、计数和鉴定。 效价：表示每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位（pfu, plaque-forming unit） 双层平板法 噬菌体增殖规律的描述方法 溶源性 溶源性或溶源现象 凡能引起溶源性的噬菌体即称温和噬菌体，而其宿主则为溶源菌。 溶源菌是一类能与温和噬菌体长期共存，一般不会出现有害影响的宿主细胞。 温和噬菌体的存在形式 游离态 指成熟后被释放并有侵染性的游离噬菌体粒子 整合态 指己整合到寄主基因组上的前噬菌体状态 营养态 指前噬菌体经外界理化因子诱导后，脱离宿主基因组而处于积极复制、合成和装配的状态。 溶源菌的表示及检测方法 E.coli K12(λ) 表示一株带有λ前噬菌体的大肠杆菌K12溶源菌株。 将少量溶源菌与大量的敏感性指示菌相混合，然后其噬菌斑的形状。 第二节 亚病毒 亚病毒：凡在核酸和蛋白质两种成分中，只含其中之一的分子病原体，即为亚病毒。 亚病毒包括类病毒、拟病毒和朊病毒。 类病毒 指一类只含RNA一种成分、专性寄生在活细胞内的分子病原体。目前只在植物体中发现。 马铃薯纺锤形块茎病，它可使Potato减产20～70%。 PSTV呈棒形结构，是一个裸露的闭合环状RNA分子，整个环由2个互补半体组成，一个是179核苷酸，另一个是180核苷酸。 拟病毒（类类病毒） 指一类包裹在真病毒粒中的有缺陷的类病毒。拟病毒极其微小，一般仅由裸露的RNA或DNA组成。 被拟病毒“寄生”的真病毒又称辅助病毒，拟病毒则成了它的“卫星”，拟病毒的复制必须依赖辅助病毒的协助。 拟病毒+辅助病毒--------拟病毒才得以复制 朊病毒（Prion） 朊病毒是一类不含核酸的传染性蛋白质分子。在1982年由美国学者研究羊瘙痒病时发现，并由此获得诺贝尔奖。 Maturation and Release 不同病毒的释放比较 不带胞膜的病毒 带胞膜的病毒 是病毒的聚集体; 是病毒的合成部位; 是病毒蛋白和与病毒感染有关的蛋白质 非病毒性包涵体,由化学因子或细菌感染形成 噬菌体效价的测定 斑点试验法 液体稀释管法 双层平板法 单层平板法 快速玻片法 45C培养 涂布菌液液 · · ·· 点样 · · 噬菌斑 斑点试验法 液体稀释管法 试样（ 未知效价的噬菌体液） 培养液和宿主细胞 计数管中完整宿主细胞数 （定时取样对活细胞计数） 噬菌体数=原细胞数 — 活细胞数 双层平板法 琼脂平板 菌液+噬菌体试样+琼脂培养基 培养10天 计数噬菌斑 噬菌斑数=试样中噬菌体数 双层 平板法 上层 平板 底层平板（2%琼脂培养基7-8ml） 噬菌体试样（合适稀释液0.1ml） 宿主菌悬液（对数期菌0.2ml） 上层培养基（1%琼脂培养基3ml） 混匀 37℃ 10余h 计数噬菌斑 快速玻片法 试样+宿主细胞 +琼脂培养基 低倍镜下计数噬菌斑 充分混匀 短期培养 布在灭菌玻片上 以培养时间为横坐标，以噬菌斑数为 纵坐标，绘出的曲线为一步生长曲线。即定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线。包括：潜伏期、裂解期和平稳期。 一次生长曲线 潜伏期 指噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至