高渗提高凝结芽孢杆菌P4-102B菌株的电击转化效率.pdfVIP

微生物学通报 Jun. 20, 2016, 43(6): 1388−1394 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160097 生物实验室 高渗提高凝结芽孢杆菌 P4-102B 菌株的电击转化效率 赵春云 杨颂 欧阳立明 王永红* (华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237) 摘 要：【目的】凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)是一种非常有工业应用前景的微生物，但遗传 转化的困难是限制对其进行代谢工程改造的关键因素。本研究主要考察生长培养基、电击缓冲液、 复苏培养基中添加高渗剂如山梨醇、甘露醇等对凝结芽孢杆菌转化效率稳定性的影响，并对凝结 芽孢杆菌电击转化条件进行优化。【方法】用穿梭质粒pNW33N 电转化凝结芽孢杆菌P4-102B ， 系统地考察高渗条件下细胞生长阶段、感受态菌体浓度、电击缓冲液组分和复苏培养基组成等因 素对转化效率的影响。【结果】同一电场压力下高渗体系转化效率较低渗体系明显提高且稳定性 较好，菌体在含有0.5 mol/L 山梨醇的LB 培养基中生长到 OD600 为 0.8 时收集，用 SMG [0.5 mol/L 山梨醇，0.5 mol/L 甘露醇，10% (质量体积比)甘油] 电击缓冲液洗涤菌体4 次制备感受态，在固 定电场强度 14 kV/cm、脉冲时间 5 ms、1 mm 规格的电转杯进行电击转化，电转化后立即加入含 有 0.5 mol/L 山梨醇和 0.38 mol/L 甘露醇的 LB 复苏培养基培养，能够获得最佳的转化效率 2 2.7×10 CFU/μg DNA。【结论】使用高渗电击转化法能够提高电击转化的稳定性和重复性，并且 可以获得较高的转化效率。 关键词：凝结芽孢杆菌，电击转化，转化效率，高渗 High osmolarity improves the electro-transformation efficiency of the gram-positive bacteria Bacillus coagulans P4-102B * ZHAO Chun-Yun YANG Song OUYANG Li-Ming WANG Yong-Hong (State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China) Abstract: [Objective] One of the genetic manipulation restriction factors in Bacillus coagulansis the absence of an efficient and reproducible transformation method. This study optimized the concentrations of the osmoticums, sorbitol and mannitol, in the growth, electroporationand recovery media and