实验一、细胞形态结构的观察和普通光学显微镜的使用.pptVIP

厚标本和薄标本 瞳 距 调 节 屈 光 度 调 节 粗 调 松 紧 调 节 旋 钮 聚 光 镜 中 心 调 节 孔径光栏调节 孔径光栏开度与图象 孔径光栏的运用 * 实验一 细胞形态结构观察和光学显微镜的使用 一. 实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。 二.试剂与器械 普通光学显微镜，兔肝细胞玻片标本，草履虫玻片标本。 基础知识 显微镜概述： 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。 1.光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成： ①照明系统：包括光源和聚光器。 ②光学放大系统：由物镜和目镜组成， 是显微镜的主体。 ③机械装置：用于固定材料和观察方便， 包括镜台(载物台) 、调节器和、 物镜转换器(旋转器)等。 尼康E-600显微镜 2.荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色） 3. 激光共聚焦扫描显微镜 LCSM照片 蓝色为细胞核，绿色为微管 4.暗视野显微镜 暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 5.相差显微镜 一种介壳虫的染色体 6. 偏光显微镜 偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。 7.微分干涉差显微镜 DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。 DIC显微镜下的硅藻（伪彩色） 8. 倒置显微镜 9. 透射电子显微镜 JEM-1011透射电子显微镜 莱卡超薄切片机 内质网透射电镜图（伪彩色） 冰冻蚀刻电镜照片 10. 扫描电子显微镜 JEOL扫描电子显微镜 人类血细胞SEM照片 11. 显微操作技术 尼康NT-88NE显微操作/注射仪 显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。 其计算公式为: D=0.61入/N·A N·A·=n · sina/2 式中D为分辨率，A为光波波长，N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2 焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 4 - 5 um 2um 基础知识 三. 实验步骤 (一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作 (1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。 (2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整 和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。 2. 显微镜的调节 调节 ⑤ 光轴中心调节螺钉 ③ 视场光栏 ③ 孔径光栏 ②10X物镜 ① 标本 ④ 聚光镜升降旋钮 N.A聚=(0.6-0.8)N.A物 100% 70% 30% *