总则实验1微生物形态观察.ppt

如何进行环境生物学实验 严肃认真 科学态度 分析问题 搞清原理 实验安排与考核 预习情况+实验操作+总结报告 微生物形态观察 水中细菌总数的测定 浊度的测定 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退 迟到 工作服 实验室严禁吸烟 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 实验内容 1.涂片：取少量菌放在载玻片上，在酒精灯上烤一下，固定细菌。（火焰固定不宜过热，以玻片不烫手为宜） 2.染色： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 实验一 微生物形态观察 实验目的 学习在油镜下观察生物个体形态。 了解革兰氏染色法的原理并熟练掌握操作步骤。 实验原理 革兰氏染色原理 由于细菌细胞壁的结构和化学组成不同，经染色后，呈现不同的染色反应，将所有细菌区分为两大类，即革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力 染色关键在于脱水溶剂的脱色作用 G+ 细胞壁通透性低，结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色 G- 细胞壁通透性高，结晶紫-碘的复合物易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色 1、菌种：培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli） 2、染色液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢哥氏碘液、95%酒精、番红染液、二甲苯溶液、香柏油、无菌水 3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。 实验器材 实验内容 1、涂片无菌操作技术 灼烧接种环 拔去棉塞 烘烤试管口 挑取少量菌体 再烘烤试管口 将棉塞塞好 做涂片 烧去残留菌体 实验内容 注意事项：①涂片不宜过厚 ②火焰固定不宜过热 ③滴加染色液与酒精时一定要覆盖整个菌膜 ④乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。 2、革兰氏染色技术 涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫初染 碘液媒染 95%乙醇脱色 沙黄复染 镜检 1min 1min 1min 水洗 水洗 水洗 水洗 30s 滤纸吸干 1 2 3 4 ？ 结晶紫 碘液 酒精 复红 1、简单染色 (四）实验方法： 制片→染色→水洗→干燥→镜检 （1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固定； 注意无菌操作 （2）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 （3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。 （4）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （5）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 crystal violet stain wash with water Stain with grams iodine solution Decolorize by adding 95% alcohol 革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌 Counterstain with Safranin ①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯液将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿。 ②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。 （10）实验完毕后的处理 1、载玻片要洁净无油迹。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。 2、革兰氏染