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第三章 高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography 第一节 高效液相色谱法的特点 一、高效液相色谱仪 二、高效液相色谱的特点 三、高效液相色谱与经典液相色谱的比较 四、高效液相色谱与气相色谱的比较 第二节 影响色谱峰扩展及分离的因素 一、热力学理论-塔板理论 二、动力学理论-速率理论 三、影响色谱分离的因素 第三节 高效液相色谱法的类型及分离原理 一、液 — 液分配色谱法 Liquid-liquid Partition Chromatography 二、液-固色谱法 Liquid-solid adsorption chromatography 三、离子交换色谱法 Ion-exchange Chromatography 四、离子对色谱法 Ion Pair Chromatography 五、离子色谱法 Ion Chromatography 六、空间排阻色谱法 Steric Exclusion Chromatography 第四节 液相色谱固定相和流动相 一、液相色谱固定相 Stationary Phase of HPLC 3.离子交换色谱分离固定相 4. 空间排阻分离固定相 二、液相色谱流动相 Mobile Phases of HPLC 1. 流动相类别 2. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 第五节 高效液相色谱仪 一、高效液相色谱流程 2.高压泵 3.梯度洗脱 4. 进样装置 5.液相色谱柱 6.液相色谱检测器 第六节 高效液相色谱分离类型选择及应用 一、分离类型选择 Choice of Separation Types 二、高效液相色谱仪应用实例  Application of HPLC 典型的高效液相色谱仪结构和流程可用下列方框图表示： 高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 HPLC使用的色谱柱所用固定相的粒度也非常小（几μm到几十μm），所以流动相在柱中流动受到的阻力很大，为了达到快速、高效分离，必须给流动相施加很大的压力，以加快其在柱中的流动速度。 HPLC使用的高压泵应满足下列条件： ???? a. 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围（一般为1～10 mL/min）； b. 能抗溶剂腐蚀； c. 有较高的输液压力；对一般分离，60×105Pa的压力就满足了，对高效分离，要求达到150～300×105Pa。 梯度洗提：就是载液中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。 类似于GC中的程序升温 (1)注射器进样装置：进样所用微量注射器及进样方式与 GC法一样。进样压力150×105Pa，当进样压力150×105Pa时，必须采用停流进样。进样技术要求高。 (2)高压定量进样阀：与GC法用的六通阀相似，能在高压下进样，进样无需停泵。 采用不同体积的定量环，重复性好，准确度高 六通阀结构图： 色谱柱是色谱仪最重要的部件（心脏）。通常用内壁抛光的不锈钢管制作的，对于一些有腐蚀性的样品且要求耐高压时，可用铜管、铝管或聚四氟乙烯管。 柱子内径一般为1～6 mm。常用的标准柱型是内径为 4.6 或 3.9mm ，长度为 15 ～ 30cm 的直形不锈钢柱。 填料颗粒度 5 ～ 10μm ，柱效以理论塔板数计大约 7000 ～ 10000 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。沃特斯超高速液相色谱UPLC (1)紫外光度检测器 Ultraviolet Photometric Detector 它的作用原理是基于被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。 对大部分有机化合物有响应，应用最广，最常用的检测器。 仪器结构图： 固定波长检测器： UV检测器特点： a. 灵敏度高：其最小检测量10-9g·mL-1。??? b. 线性范围宽；???  c. 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；??? d. 对流动相的流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱；? ??e. 波长可选，易于操作：如可变波长检测器。??? 缺点：对紫外光完全不吸收的试样不能检测；同时溶剂的选择受到限制 （2）光电二极管阵