3分解纤维素的微生物得分离.ppt

培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 氢元素、氧元素 鉴别纤维素分解菌的培养基 方法一：先 ，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在 时就加入刚果红。 刚果红染色法 挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 培养微生物 倒平板 方法一：在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1mg/mL的CR溶液，10~15min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。 方法二：配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液，灭菌后，按照每200mL培养基加入1mL的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出菌落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。 方法一中NaCl溶液的作用？ 思考： 漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。 这两种方法各有哪些优点和不同？ 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 选择培养基和鉴别培养基的区别 选择培养基上的菌类，有2种或两种以上时，只有适应环境(选择培养基的基底)的菌种才能存活。鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以上时，在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物(但培养基上的各个菌种均不死亡)。 成分中有了青霉素，那肯定是选择培养基(青霉素是抗菌素的一种，是从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素。既然青霉素的作用是杀菌，那么实验对象必然是细菌，普通的细菌必然死亡，只能是具有抗性的存活下来，所以是选择培养基)，因为成分中有糖类，所以同化类型为异养型(成分中加入了糖类，那么就表明这种细菌需要糖类物质，否则成分里就不会有，糖类是能源物质，说明了这些细菌需要外界提供能量，是异养型的。)，培养细菌，可能为了选出具有抗青霉素能力的细菌突变体。 比较项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培养 基 原理 培养基类型 目的 将细菌涂布在只有 尿素做氮源的选择 培养基上 将细菌培养在只有 纤维素粉做碳源的 选择培养基上 固体培养基 液体培养基 筛选菌株 选择培养，增加浓度 比较 项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 鉴 定 培养基 原理 现象 方法 脲酶检测法 刚果红染色法 在细菌分解尿素的化学反应 中，细菌合成的脲酶将尿素 分解成了氨，氨会使培养基 的碱性增强，pH升高。在培 养基中加入酚红指示剂，如 果pH升高指示剂会变红 刚果红可以与纤维素形成 红色复合物，当纤维素被 纤维素酶催化分解后红色 复合物无法形成，培养基 上就会出现以纤维素分解 菌为中心的透明圈 观察菌落周围是否有红色的 环带出现来鉴定尿素分解菌 观察菌落周围是否出现 透明圈来筛选纤维素分解菌 四、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 2.分离的结果是否一致 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。 分离培养微生物的一般方法 1.选取样品。根据选择的目的而定。例如从土壤中选择某种微生物，则要从土壤中取样，如果要选择分解原油的微生物，则要从具有原油的土壤等处取样。 2.配制培养基。这是实验的关键，首先要根据所选微生物的代谢特点等因素确定选择培养基的配方，比如选择分解尿素的细菌，则尿素为唯一的氮源，选择分解纤维素的细菌，则纤维素是唯一的碳源，然后制备培养基。 3.样品培养。包括扩大培养和鉴定培养，如果样品中的所需微生物的浓度很高，也可以不进行扩大培养，但一定要进行鉴定培养，鉴定的方法也根据微生物的代谢特点而定。 分解纤维素的