HPLC在清洁验证中的应用.doc

HPLC在设备清洁验证中的应用 温艳 宁夏工商职业技术学院 银川750021 摘要 目的 通过对设备各部件清洁程度的验证，建立一个防止交叉污染的正确评价方法。方法 以小儿速效感冒冲剂清场为例，采用高效液相色谱法测定清洗液中对乙酰氨基酚的残留量。结果 确定了清洁验证方案。结论 该检测方法、取样方法的回收率及相对标准偏差符合文献[1]报道，适用于设备的清洁验证。 关键词 HPLC 小儿速效感冒冲剂 对乙酰氨基酚 残留量 清洁验证 固体制剂生产过程中，由于存在粉尘飞扬和固体残留物，在更换品种时极易造成来自设备清洁不彻底的微量污染。换品种时设备的清洁工作是否彻底需要验证，因此建立一个适用于固体制剂车间设备（混合机、筛粒机、粉碎机、摇摆式颗粒机、压片机、包装机等）的清洁验证方案很有必要。以小儿速效感冒冲剂清场为例，该处方中对乙酰氨基酚的含量较大，在清洁过程中如果对乙酰氨基酚的残留量检测符合规定，那么处方中其它组份因含量少，残留物就更容易清洁彻底。本文采用高效液相色谱法测定清洗液中对乙酰氨基酚的残留量，本法快速、简便、灵敏度高、专属性强。由此建立了一个防止交叉污染的科学评价方法、设备各部件清洁程度的正确取样方法及其残留物的检测方法。 1 试验方法[2] 1.1仪器与试药 JASCO－1500型高效液相色谱仪（日本），UV－1575紫外检测器，色谱柱DiamonsilTMC18 (Ф4.6×200㎜),对乙酰氨基酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。 1.2色谱条件 流动相：甲醇－水（52：48）；紫外检测波长：232nm；流速 ：1.0mL/min；进样量：20μL。 1.3线性关系试验 精密称取对乙酰氨基酚对照品适量，加流动相制成0.08mg/ mL 的溶液，分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置25 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进行测定，结果见表1： 表1 线性关系测定（n=4 n为进样次数） 进样浓度（μg/ml） 3.54 7.08 10.62 14.16 17.70 峰面积 239134 487269 725403 964538 1235672 以浓度X（μg/ml）为横坐标，峰面积Y为纵横坐标进行线性回归，回归方程为： Y=6.978×104X－1.007×105 r=0.9997 线性范围为3~17μg/ mL 。 1.4精密度试验 取同一份对照品溶液，按上述色谱条件连续进样，对乙酰氨基酚峰面积的RSD（n=6 n为进样次数）为0.12%。 1.5回收率试验 回收率溶液的配制：精密称取四份已知含量的对乙酰氨基酚约30mg置200 mL 容量瓶中，加入适量糖粉，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀、滤过，取续滤液2 mL ，分别置25 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度。按上述色谱条件进样，分别测定对乙酰氨基酚的回收率，结果见表2： 表2 回收率试验测定结果（n=4） 加入量（μg/ml） 4.52 12.62 13.58 17.84 回收量（μg/ml） 4.54 12.54 13.73 17.87 回收率（%） 100.4 99.4 101.1 100.2 RSD（%） 0.53 0.21 0.62 0.11 平均回收率为100.3% 1.6结果与评价 对乙酰氨基酚进样浓度在3~17μg/ mL 范围内呈良好的线性关系，其平均回收率为100.3%，精密度试验为RSD（n=6）0.12%，因此用高效液相色谱法测定设备清洗液中对乙酰氨基酚的残留量，方法切实可行，专属性强，灵敏，简便。 2 取样方法验证（用于化学法测定） 2.1回收率试验 精密称取对乙酰氨基酚对照品适量，加流动相配成约0.08mg/ mL 的溶液。吸取上述溶液0.5、1.0、1.5 mL 分别喷洒在九块干净光洁的玻璃板上，每个浓度喷洒三次，用电吹风温和地吹干玻璃板上喷洒的溶液，然后分别用棉签蘸少量流动相，用固定的方法（擦拭速度和擦拭路线相同）擦每块玻璃板上喷洒的溶液。将擦过的棉签分别放入九支试管中，精密加入10 mL 流动相，具塞，振摇1分钟，然后用玻棒搅拌数分钟，放置10分钟，使对乙酰氨基酚溶出。用“1试验方法”测定三个浓度对乙酰氨基酚的平均回收量，结果见表3： 表3 对乙酰氨