2016-2017高中生物 专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定课件 新人教版选修1.ppt

生物选修1（人教版） 专题5　DNA和蛋白质技术　　　　　　　　　　　　 　　　　　 课题1　DNA的粗提取与鉴定 要点突破 一、DNA粗提取的原理 1．DNA溶解度 2.DNA与蛋白质对蛋白酶、高温、洗涤剂的耐受性的区别 盐析和高温对DNA活性的影响不同 ①盐析过程中DNA的空间结构不变，没有变性，只是溶解度降低。 ②高温使DNA和蛋白质变性时破坏的键不同。DNA变性时，氢键被破坏，而蛋白质变性时往往破坏二硫键，因此降温时DNA能复性，而蛋白质不能。 例1 DNA在NaCl溶液中的溶解度有两重性，随NaCl溶液浓度的变化而变化，则下图所示能反映DNA的溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是(　　) 解析：DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低。 答案：C 　　　　　　　 ?变式训练 1.若选择的实验材料为植物细胞，则破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐。加入洗涤剂的目的是() A．利于DNA的溶解　 B．分离DNA和蛋白质 C．溶解细胞膜　 D．溶解蛋白质 解析：洗涤剂是一种离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 答案：C 二、DNA粗提取和鉴定的实验过程的分析 1．方法步骤 2．DNA粗提取与鉴定实验中的数字总结 (1)1次加入酒精：提取含杂质较少的DNA。 DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。在含DNA的溶液中加入冷却的体积分数为95%的酒精，其目的是为了提取含杂质较少的DNA。 (2)2次加入蒸馏水：目的不同。 第一次向鸡血细胞液中加入蒸馏水，是为了得到浓度低于血细胞内部浓度的溶液。这样水分子会大量渗入血细胞中，使血细胞吸水涨破而释放DNA。 第二次向2 mol/L NaCl溶液中加入蒸馏水，是为了使NaCl溶液的浓度降低到0.14 mol/L，从而使DNA分子从NaCl溶液中析出。 (3)3次过滤：DNA存在的部分及所用的纱布层数不同。 第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNA的滤液，使用的纱布为1～2层。 第二次过滤含有黏稠物的NaCl溶液，是为了得到从低浓度的NaCl溶液中析出的附着在纱布上的含DNA的黏稠物，所用的纱布为多层。 第三次过滤溶解有DNA的NaCl溶液，目的是为了使DNA再溶解，所以只要用两层纱布即可。 (4)4次调整NaCl溶液的浓度：目的不同、使用的NaCl溶液的浓度不同。 第一次在含DNA的滤液中，加入NaCl，调整NaCl溶液的物质的量浓度为2 mol/L ，必须充分混合均匀。目的是加速染色质中DNA与蛋白质的分离，使DNA充分游离并溶解在NaCl溶液中。 第二次调整NaCl溶液的物质的量浓度为0.14 mol/L，此时DNA的溶解度最小，目的是析出DNA。 第三次调整NaCl溶液的物质的量浓度为2 mol/L，目的是使DNA再次溶解。 第四次调整NaCl溶液的物质的量浓度为0.015 mol/L(或2 mol/L)，目的还是为了溶解DNA。 (5)6次用玻璃棒搅拌：目的不同。 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液，目的是加速鸡血细胞的破裂。 第二次搅拌2 mol/L含DNA的NaCl溶液，目的是加速DNA的溶解。 第三次搅拌加蒸馏水的NaCl溶液，目的是均匀稀释NaCl溶液至0.14 mol/L，以析出更多的DNA。 第四次搅拌含DNA的2 mol/L的NaCl溶液，目的是加速DNA的溶解。 第五次搅拌体积分数为95%的含DNA的酒精，目的是提取含杂质较少的DNA。 第六次搅拌0.015 mol/L(或2 mol/L)含DNA的NaCl溶液，目的还是加速DNA的溶解。 3．该实验成功的关键 (1)破碎细胞应彻底充分。 (2)对提取的含杂质较多的DNA进行提纯时，所用的酒精必须经过充分预冷后才能使用。 (3)实验过程中，搅拌时玻璃棒不能直插烧杯底部，并且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。 (4)由于玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基也带电荷而被吸附于玻璃表面，故实验中应尽量不使用或少使用玻璃器皿，这样可以提取到较多的DNA。 (5)常温下，二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 ①哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，无DNA分子，不能作为提取DNA的实验材料。 ②若选取肝脏细胞或植物细胞，由于肝组织含较多蛋白质纤维，植物组织有胞间连丝和细胞壁，则必须充分研磨。 ③过滤时不能用滤纸代替纱布，否则会因DNA被吸附到滤纸上，而导致DNA大量损失。 ④相关试剂的作用辨析： a．柠檬酸钠：作为抗凝剂，防止血液凝固。 b．洗涤剂：能够瓦解细胞膜，释放内含物DNA。 c．食盐：可以加速核蛋白解体，游离出DNA分子。 例2　下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用