食物中蛋白质含量的测定.doc

一、实验摘要： 蛋白质是含一定量氮的有机化合物。0.2-2mg/ml） 凯氏定氮法 （粗蛋白测定，0.2 – 2.0mg /ml) 双缩脲法 （1-10mg /ml) 福林酚法 （0.005-0.10mg /ml) G250 （0.025-0.20mg /ml) （考马氏亮蓝法） BCA法 （0.010-1.2mg/ml；0.0005-0.001mg/ml） 此次实验采用牛奶样品在凯氏烧瓶中经硫酸消化后蛋白质分解，与硫酸硫酸铵，再在强碱条件下蒸馏出氨，用硼酸吸收，标准酸滴定，根据标准酸消耗的量，乘以一定系数，即可计算样品中蛋白质的含量。、H、HO逸出，而氮以氨的形式与硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液用NaOH碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。用标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，从消耗的盐酸标准液计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。 1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4 H2SO4==SO2↑+ H2O +[O] R-CH2-COOH+[O]==R-CO-COOH+ NH3↑ R-CO-COOH+[O]==nCO2↑+m H2O 2 NH3+ H2SO4==（NH4）2SO42.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中。 反应式: (NH4)2SO4+2NaOH→NHOH+Na2SO4 →2NH3↑+2H2O NH3+4H3BO3→NH4H2B4O7+5H2O 3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。 反应式： NH4H2B4O7+HCL+5H2O→NH4CL+4H3BO3 四、实验试剂及器材： （一）试剂 1、硫酸铜（CuSO4·5H20）、硫酸钾——预混粉1.2g 2、硫酸（98%） 3、硼酸溶液（20g/L） 4、氢氧化钠溶液（400g/L） 5、0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。 6、混合指示试剂：（0.1%甲基红乙溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合）CuSO4：催化剂 滴加20mL水 NaSO4、K2SO4 H2O2：加速反应 空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。 2、定氮装置的检查与洗涤 1）洗涤：2~3次，从样品进口入加水（约占反应管三分之一体积）→蒸汽的入口处通水（反应管中的废液倒吸流到反应室外层）→打开夹子b由橡皮管排出 2）检查微量定氮装置是否装好 3）装管：蒸气发生瓶内装水约三分之二，加3粒玻璃珠以防暴沸；蒸馏液接收瓶中加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性 3、碱化蒸馏 100ml烧杯：硼酸40mL+混合指示剂4~5滴→反应室：准确吸取10.0mL样品消化液→小玻杯：4mL氢氧化钠→溶液变得混浊不清，且有黑色出现→通入蒸汽蒸腾10min →移动接收瓶，液面离开凝管下端→蒸馏2min，直到小烧瓶中的溶液达到80~90mL→少量水冲洗冷凝管下端外部→以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色→同样做空白试验 注意： 1）冷凝管的下端插入硼酸液面下 2）正式实验时，螺旋夹a关闭 3）棒状玻塞应塞紧，旋转玻塞使氢氧化钠其缓缓流入反应室 ▲ 5、数据记录 项 目 空白 第一次 第二次 样品消化液（mL） 10 10 10 滴定消耗盐酸标准溶液（mL） 0．469 3.538 3.600 平均消耗标准盐酸溶液（mL） 3.569 酪蛋白粗提物在牛奶蛋白中比例：0.13/｛C*(V1-V2)*0.01401/(m*10/100)｝=29.9% 六、实验结果： 蛋白质% =｛C*(V1-V2)*0.01401/(m*10/100)｝*F*100 = 2.77% 样品蛋白质含量（g/100g） V1——样品滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL） V2——空白滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL） C——盐酸标准滴定溶液浓度（mol/L） 0.0140 ——1.0mL盐酸标准滴定溶液相当的氮的质量（g） m——样品的量g（1mL） F——氮换算为蛋白质的系数，乳制品为6.38 七、结果讨论与误差分析： 本实验中，经过公式计算，最终得率为2.77%，误差分析如下： 1．装置密闭性不好或因