《基因工程和蛋白质工程实验指导》.PDF

  《基因工程与蛋白质工程实验指导》 供生物技术专业使用      海南医学院理学院 生物化学教研室 生物技术专业实验室 基因工程与蛋白质工程教研室 目 录 第一部分 理论 第一章核酸的提取与分离 2  第一节 真核基因组DNA分离与纯化的基本原理及方法 4  第二节 质粒DNA的提取与纯化的原理与方法 5  第三节 RNA提取的原理与方法 8  第二章核酸的鉴定与分析 11  第一节核酸的定量及定性分析 11  第二节核酸凝胶电泳 11  第三节核酸分子杂交技术 14  第四节聚合酶链式反应技术 16  第三章   蛋白质分析技术 19  第二部分 实验 实验一   人外周血白细胞基因组DNA的制备 33  实验二  人外周血白细胞基因组DNA的制备 35  实验三 植物组织基因组DNA的制备 36  实验四 DNA的琼脂糖凝胶电泳 37  实验五  低熔点琼脂糖凝胶挖块回收实验 38  实验六 紫外分光光度法分析核酸的浓度及纯度 40  实验七  聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因（β珠蛋白基因）片段 41  实验八   目的基因（β珠蛋白基因）片段克隆以及阳性克隆的筛选 43  （1）  克隆(感受态细胞的制备) 43  （1）  克隆（质粒的转染） 44  （2） 筛选（ 蓝斑筛选法 ） 45  （2） 筛选（菌落的PCR鉴定） 46  （2）鉴定( 质粒DNA的提取) 47  （2） 筛选（限制性内切酶酶切鉴定法 ） 49  实验九 真核细胞RNA的制备（异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法，AGPC法） 51  实验十 真核细胞RNA的制备——TRIzol 试剂盒抽提法 53  实验十一 设计性综合实验  G6PD cDNA 重组子原核表达的研究 55  1 第一章核酸的提取与分离 核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于 生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传 统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。本章将针对核酸的分离纯 化原理及方法进行讨论。 胞内的核酸包括 DNA 与 RNA 两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。 DNA 与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白，RNA 与蛋白质结合成核糖核蛋白。其中真核生物 的 DNA 又有染色体 DNA 与细胞器 DNA 之分。前者位于细胞核内，约占 95%，为双链线性 分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内，约占 5%，为双链环状分子。除此之外，在原核生物中 还有双链环状的质粒 DNA；在非细胞型的病毒颗粒内，DNA 的存在形式多种多样，有双链环状、单链环 状、双链线状和单链线状之分。DNA分子的总长度在不同生物间差异很大，一般随生物的进化程度而增 长。如人的 DNA