杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达和组装.PDF

2010;30(7) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 窑1491窑 杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装 1,2 2 1 3 1 1 1 2 龙 虎 袁姚伦广 袁王姗姗 袁陈士新 袁谭佩婵 袁孙京臣 渊 华南农业大学动物科学学院袁广东广州袁510642曰 南 3 阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室袁河南南阳袁473061曰 海军广州基地赤沙干休所袁广东广州510230冤 摘要院目的 构建能同时表达轮状病毒vp2尧vp6尧vp7 基因的重组家蚕杆状病毒袁并在BmN 细胞中进行初步表达遥 方法 利用MA104 细胞繁殖人A组轮状病毒袁RT-PCR 扩增病毒结构蛋白vp2尧vp6尧vp7 基因袁 连接至转移载体pFBDM 和 pUCDM 中袁同时引入含IE1 启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量袁再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构 建重组病毒遥 为方便检测基因的表达袁在VP7 的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签袁可通过ELISA等方法快速检测目 的基因表达遥 结果 扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因袁 构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体袁 ELISA检测VP7 得到了表达袁在BmN 细胞中观察到病毒样颗粒遥 结论 成功构建杆状病毒多基因的表达系统袁为生产 多亚基蛋白复合物袁研究大分子结构提供借鉴遥 关键 院轮状病毒样颗粒曰家蚕杆状病毒曰多基因表达系统曰BmN 细胞曰疫苗 中图分类号院Q939.47;R512.5;S852.65 文献标识码院A 文章编号院1673-4254渊2010冤07-1491-05 Expressionandassemblyofrotavirus-likeparticlesininsectcellsmediatedbyrecombinant Bombyxmori MultiBac 1,2 2 1 3 1 1 LONGHu ,YAOLun-guang,WANGShan-shan,CHENShin-xin,TANPei-chan,SUNJing-chen 1 2 CollegeofAnimalScience,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China; HenanProvincialKeyLaboratoryofFuniu MountainInsectBiology, NanyangNormalUniversity, Nanyang473061, China; 3NavalBaseinGuangzhou, ChishaSanatoriumfor RetiredCadres,Guangzhou510230,China Abstract: Objectives Toconstructrecombinantbaculovirusesco-expressingthreestructuralgenesvp2, vp6andvp7of rotavirus, andassemblerotavirus-likeparticles (VLPs) inBmNcells. MethodsHumangroupArotaviuswascultivatedin MA104cells,andtheRNAwasextractedandthethreegeneswereobtainedbyRT-PCR.ThePCRproductswereinsertedinto thetransfervectorspFBDMandpUCDM, respectively. Aenhancedgreenfluoresce