柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆与分析.PDF

— ２４— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第３期 仇保丰，景　瑾，董蓉莲，等．柔嫩艾美耳球虫江苏株ＳＡＧ１０基因的克隆及分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（３）：２４－２８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０３．００６ 柔嫩艾美耳球虫江苏株ＳＡＧ１０基因的克隆及分析 １ ２ ３ ２ ２ ２ ２ １ １ 仇保丰 ，景　瑾 ，董蓉莲 ，宋鸿雁 ，刘　春 ，朱顺星 ，邵义祥 ，刘文斌 ，李　建 （１．南通出入境检验检疫局，江苏南通２２６００４；２．南通大学实验动物中心，江苏南通２２６００１； ３．江苏省疾病预防控制中心，江苏南京２１０００９） 　　摘要：根据ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）ＳＡＧ１０基因序列，利用计算机软件设计 １对引 物，从Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ江苏株的第２代裂殖子中成功克隆出ＳＡＧ１０基因。将该基因与ＧｅｎＢａｎｋ中国内外不同Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ分 离株的ＳＡＧ１０基因进行比对，发现Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ江苏株与北京株的ＳＡＧ１０基因同源性最高，高达９９％，其后依次为杨凌 株、豪顿株。４种不同分离株ＳＡＧ１０基因的ＯＲＦ之间有１１个碱基不同，其中３个为无义突变，８个为有义突变。分析 ４种分离株ＳＡＧ１０基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现，国内外不同Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ分离株ＳＡＧ１０蛋白的 抗原性总体比较接近且很强，但国内不同分离株之间的抗原性更加接近，并优于国外的豪顿株，这可能是由于氨基酸 突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述ＳＡＧ１０基因序列与复顶门原虫的其他相关ＳＡＧｓ基 因序列进行遗传进化分析，发现Ｅｉｍｅｒｉａ属球虫ＳＡＧｓ基因之间相对比较保守，且与犬新孢子虫（Ｎｅｏｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ）、Ｎ． ｈｕｇｈｅｓｉ、刚地弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）的ＳＡＧ基因之间同源性较低，与已有观点一致；但神经肉孢子虫（Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ ｎｅｕｒｏｎａ）的２条ＳＡＧ１基因序列却与Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ的ＳＡＧ１基因序列表现出更高的同源性，这与其他研究结论不符。 　　关键词：柔嫩艾美耳球虫；ＳＡＧ１０基因；克隆；分析 　　中图分类号：Ｑ７８５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０３－００２４－０４ 　　鸡球虫基因克隆始于１９８７年，迄今已有２４０多个基因被 公布的Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ豪顿（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ）株、北京（Ｂｅｉｊｉｎｇ）株、杨凌 ［１］ 成功克隆，鸡球虫的重组疫苗也得到了广泛研究 。有分析 （Ｙａｎｇｌｉｎｇ）株 的 ＳＡＧ１０基 因进行 比对和分析，为研究 认为，参与艾美耳球虫宿主细胞入侵过程的相关分子是最具 Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａＳＡＧ１０的生物学功能、筛选Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ保护性抗原 应用潜力的保护性抗原，如子孢子和裂殖子表面抗原（ｓｕｒｆａｃｅ 等工作提供依据。 ａｎｔｉｇｅｎｓ，简称ＳＡＧｓ）以及微线、棒状体、折光体等分泌型亚细 ［１－２］ １　材料与方法 胞器的分泌蛋白 。柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）表面 抗原ＳＡＧ１０（ｓｕｒｆａｃｅａｎｔｉｇｅｎ１０）是一种 Ｃ端具有疏水性的糖 １．１　试验材料 基化磷脂酰肌醇（ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ，简称 ＧＰＩ）锚定 １．１．１　球虫卵囊　Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ分离自江苏省某鸡场，由南通 ［３］ 结构域的表面蛋白 。由于ＳＡＧ１０基因在Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ子孢子 市出入境检验检疫局有害生物检疫实验室鉴定并保存。 和第２代裂殖子阶段均有表达，且 ＳＡＧｓ被认为在启动顶复 １．１．２　试验鸡　１日龄ＡＡ肉鸡，购自江苏省南通市某商品 门原虫识别、黏附