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连续热裂解法大规模提取质粒DNA.pdf
业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (1): 51~54
·研究论文·
连续热裂解法大规模提取质粒DNA*
1 1 2 2 2 1,2
朱开春 张富春 肖 冲 何忠淮 金华利 王 宾 **
(1 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐830046;
2 中国 业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室，北京 100094)
： ，
摘要 选择质粒保有率高及最适合发酵的TOP10 菌 ，在传统的煮沸裂解法提取质粒的基础上进行了提取方法的改进
使用恒流泵和热交换螺旋管，使菌体在流动过程中完成热裂解，释放质粒DNA。改进后的方法裂解温度可降到70℃，提取工艺
流程简单，缩短了提取时间，提高了质粒DNA 的提取效率。利用本方法提取的质粒大小正确、纯度合格，每升发酵液得率平均
为 100 mg 质粒DNA 。
：
关键词 连续; 热裂解; 质粒DNA
中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 1006-1304(2006)01-0051-04
Large-Scale Plasmid DNA Preparation by Flow-Through Thermal Lysis
ZHU Kai-Chun 1 ZHANG Fu-Chun 1 XIAO Chong2 HE Zhong-Huai2 JIN Hua-Li2 WANG Bin 1,2**
A streamline process of plasmid extraction were developed based on the modified boiling lysis in order to simplify the
operation and process for a large volume of culture. strain Top10 was selected and used in fermentation
because of its stability for hosting plasmids and consistency in the extraction process. The employment of a constant flow pump and a
thermal exchange coil enables the lysis step controllable. The size and the purity of plasmids obtained from the process were
confirmed and acceptable. Using this method, an average at 100 mg of plasmid could be achieved from one liter fermented culture.
flow-through; thermal lysis; plasmid DNA
能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫(Ulmer 质粒DNA 通常是通过大肠杆菌细胞的培养和
,1993,Wang
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