的表达纯化和结晶.PDF

第 32 卷 第 2 期 天津科技大学学报 Vol. 32 No. 2 2017 年 4 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Apr. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 睾丸酮丛毛单胞菌 CNB1 中 2–氨基–5–氯粘康酸半醛脱氢酶 的表达纯化与结晶 1, 2 1, 2 2 1 陈文成 ，谢元美 ，刘 祥 ，赵树欣 (1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 天津国际生物医药联合研究院，天津 300457) 摘 要 ：硝基苯类化合物作为一种重要的化工原料 ，在工业广泛应用的同时也产生了环境污染．目前降解硝基苯类污 染物的方法有物理法、化学法和生物法 ，其中生物修复法具有低成本、无二次污染、生态恢复性好等优点．硝基苯类化 合物中的对氯硝基苯是一种高毒 、危险的合成品 ，会对人体造成直接或间接的生理损伤．来源于睾丸酮丛毛单胞菌 CNB1 (Comamonas testosteroni CNB1)的 2–氨基–5–氯粘康酸半醛脱氢酶 (2-amino-5-chloromuconic semialdehyde de- hydrogenase ，CnbD)是对氯硝基苯降解通路中的关键酶．研究 CnbD 的晶体结构有助于完善生物修复治理对氯硝基苯 +)上进行原核表 污染的机制．实验以睾丸酮丛毛单胞菌 CNB1 中的 CnbD 为研究对象，将基因 cnbD 克隆到 pET-28,a ( 达．通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析等纯化方法获得重组蛋白 CnbD．在 289,K 下获取了 2 种重组蛋白 CnbD 晶 体 ，并在同步辐射光源 BL19,U 光束线的 0.10,nm 波长 X 射线衍射下得到最高衍射分辨率分别为 0.18,nm 和 0.22,nm 的衍射数据．采用分子置换法 ，初步解析了 CnbD 的同源四聚体结构． 关键词 ：2–氨基–5–氯粘康酸半醛脱氢酶；对氯硝基苯；睾丸酮丛毛单胞菌；蛋白晶体；分子置换法 中图分类号：Q518.3 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-6510 (2017)02-0019-05 Expression ，Purification and Crystallization of 2-amino-5-chloromuconic semialdehyde dehydrogenase from Comamonas testosteroni CNB1