从大肠杆菌获得重组胰岛素原的高通量筛选和工艺开发.PDF

应用说明文档28-9966-22 AA 开发开发题 专 用 应 子 分 大 从大肠杆菌获得重组胰岛素原的高通量筛选与工艺 开发 本“应用指南”描述了在大肠杆菌中表达的重组胰岛素原 筛选设定的条件随后可用HiTrap™或HiScreen™预装层 从PreDictor™板筛选到400 mL中试级的完整纯化工艺开 析柱进行验证和优化。带有缓冲液制备和DoE （实验设 发流程。采用PreDictor 96孔预装过滤板、Assist软件和 计）支持功能的AKTA™ avant 25层析系统，简化了在层 装填了1 mL填料的Tricorn™ 5/50层析柱来探索捕获阶段 析柱上的优化，并可通过如HiScale™16/40的层析柱， 的最佳条件。高通量筛选迅速减少了候选层析填料的类 将工艺放大到中试级水平。采用AKTA avant 150系统和 型，并为进一步研究所需的结合及洗脱条件提供了建议。 AxiChrom™层析柱，规模还可进一步的放大。 当捕获阶段条件经过进一步优化和验证后，纯化规模被 B链 扩大400倍。放大平稳且可预测，最终目标产物的回收 A链 率和纯度分别达到96%和82% 。此外，与柱层析法相比 C肽 较，PreDictor板的筛选还节省了相当多的时间和样品。 第二项研究（1）描述了胰岛素原经酶解获得的胰岛素的 中度纯类似工艺流程。 图1.胰岛素原分子简图 引言 本应指南描述了通用电气医疗集团的工艺开发平台，目 的是探索一种捕获重组胰岛素原的稳健方法（图1）。 在工艺开发过程中引入高通量方法能提高效率。减少下 PreDictor板和Assist软件用于确定适用于捕获阶段的层析 游纯化开发步骤所需的时间和样品用量，就可使收益有 填料类型及可能的结合和洗脱条件（2）。根据筛选结果， 所提高。如今，GE Healthcare Life Sciences提供了多种 Capto™ MMC（一种多模式阳离子交换填料）能够直接 产品来提升工艺开发的效率。 与不经稀释的样品结合，被选为最有希望的填料。以筛 PreDictor 96孔板（预装填BioProcess™层析填料）适用 选实验中发现的结合及洗脱条件为起点，在装填了1 mL 于纯化条件和填料的高效、高通量初次筛选。Assist软件 填料的Tricorn 5/50柱上进行了捕获步骤的优化。稳健的 简化了实验设置以及数据管理和评估的过程。 捕获方案一旦建立，工艺可从Tricorn放大到到HiScreen 预装填柱。进一步成功地以Capto MMC装填的HiScale 16/40柱（柱床高度20 cm）再最终放大到到AxiChrom 50/300柱（柱床高度19.5 cm，装填柱的床体积400 ml）。 题 专 用 应 子 分 大 材料和方法 层析柱： Mono Q 5/50 GL (1 mL) 试样： 利用已冲洗注射液注入25 μL的试样