人LINGO-1aa76-319蛋白的原核表达与多克隆抗体制备.PDF

南方医科大学学报 2175 2009;29(11)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% (J%South%Med%Univ) · · 人LINGO-1aa76-319 蛋白 原核表达及多克隆抗体制备 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 吕 俊 鲁 辛 徐如祥 姜晓丹 胡昌辰 蔡颖谦 杜谋选 邹雨汐 秦玲莎 南方医科大学 珠江医院神 ， ， ， ， ， ， ， ， （ 经外科 2 内分泌科 广东 广州 510282 ， ， ） 摘要 目 表达和纯化带多聚组氨酸 6 His 标签的人 LINGO-1 胞外段 hLINGO-1 融合蛋白 并制备兔源性抗 ： （ × ） （ aa76-319 ） ， hLINGO-1 的多克隆抗体 pAb 方法 利用PCR 从pCMV-SPORT6 获得hLINGO-1 编码序列 将其亚克隆至 aa76-319 （ ）。 aa76-319 ， 原核表达载体pET30a(+) 构建重组表达质粒pET30a(+)-hLINGO-1 将阳性重组质粒转化大肠杆菌 IPTG 诱导表 ， aa76-319 ； ， 达 6 His-%hLINGO-1 融合蛋白 经Ni-NTA 螯合树脂纯化 纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清 Protein% ， ， ， × aa76-319 A%Sepharose 柱纯化获得多抗 ELISA 法检测抗体效价 Western%blot 法检测抗体特异性 结果 成功构建了pET30a(+) ， ， 。 -hLINGO-1 原核表达载体 原核蛋白hLINGO-1