一种适用于产朊假丝酵母的基因敲除系统与其在gsh1基因敲.PDF

微生物学通报 JUN 20, 2011, 38(6): 795−802 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 一种适用于产朊假丝酵母的基因敲除系统及其 在gsh1 基因敲除中的应用 1 1* 2 2 2 张君丽 卫功元 董红军 朱泰承 李寅 (1. 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院 江苏 苏州 215123) (2. 中国科学院微生物研究所 北京 100101) 摘 要: 报道一种适用于产朊假丝酵母 Candida utilis 的基因敲除系统, 利用该敲除系统获得gsh1 基因敲除杂合突变株。根据不同种属酵母菌 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白质的保守序列, 克隆 C. utilis SZU 07-01 的gsh1 基因; 以商品化质粒pPICZalpha A 为基础, 构建gsh1 基因的敲 除载体pPICZalpha A-kan 3, 其中, kan 基因的启动子 TEF 被替换为来自于 C. utilis SZU 07-01 的 GAP 启动子(pGAP : kan) 。质粒电转化C. utilis, 获得gsh1 基因敲除杂合突变株 C. utilis GSH-6 。 结合发酵培养得到的数据进行分析, 突变株的γ-GCS 酶活比出发菌株降低 17.5%, GSH 合成量降 低61%, 细胞干重降低18.5%。所构建敲除组件pGAP : kan 的成功应用为从分子水平研究C. utilis 中谷胱甘肽(GSH)的生理功能提供了一种新借鉴。 关键词: 基因敲除, gsh1 基因, 产朊假丝酵母, 谷胱甘肽, γ-GCS 酶活 A new knocking-out system in Candida utilis and its application on disrupting the gsh1 gene ZHANG Jun-Li1 WEI Gong-Yuan1* DONG Hong-Jun2 ZHU Tai-Cheng2 LI Yin2 (1. School of Basic Medicine and Biological Science, College of Medicine, Soochow University, Suzhou, Jiangsu 215123, China) (2. Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China) Abstract: In this study, we report a novel system of gene knocking-out in C. utilis SZU 07-01 by suc- cessfully disrupting the gene of gsh1 . First of all, the gsh1 (encoding γ-GCS protein)