猪繁殖与呼吸综合征病毒JL07SW株Nsp9基因的序列分析及原核表达.pdf

网络出版时间：2011-5-7 17:32 网络出版地址：/kcms/detail/15.1209.s1732.011.html 第 32 卷 第 1 期 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 Vol. 32 No. 1 2011 年 1 月 Jan. 2011 Journal of Inner Mongolia Agricultural University JL07SW Nsp9 ٭ 1 1٭ 1٭ 1 2 ﹙1. 吉林大学 畜牧兽医学院，长春 130062 ；2 . 广东省农科院兽医研 所，广州 510000 ﹚ 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 BJ −4株及变异毒株 （HB −1SY、0608 H、N −HWH、uN4 等 ）的核苷酸序列，利 用 Primer 软 设计合成针对 PRRSV Nsp9 基因保守区域的特异性引物。用 RT −PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合 征病毒 JL/ 07 / SW 株 Nsp9 基因片段，克隆到 pMD18 −T载体并测序，基因克隆至表达载体 pET −28a（+ ），得到重组 表达载体 pET −28a−Nsp9，转化 BL2 1 （DE3 ）细胞。经 IPTG 诱导，Nsp9 蛋白以包涵体形式表达，SDS −PAGE分析表 明重组蛋白的分子量约为 34 . 8 kD，表达量 占菌体蛋 白的 40 . 32 % 。Western −Blotting结果表 明重组蛋 白可被 PRRSV 阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步制备抗 Nsp9 单抗及建立区分野毒和灭活毒感染的 ELISA 方法 提供物质基础。 猪繁殖与呼吸综合征病毒； Nsp9 基因； 克隆序列分析； 原核表达 S858. 286 . 3 A 1009 −3575﹙2011 ﹚01 −0007−06 P ROKARYOTIC EXP RE S SION AND SEQUENCE ANALYSIS OF NSP 9 GENE OF P RR SV J L07 SW STRAIN 1 1٭ 1٭ 1 2 HUANG Zhi − iang， ZHANG Xue −dong ， DING Zhuang ， ZHANG Quan −peng， XUAN Hua ﹙1. College of Animal Science and Veterinary Medicine，Jilin University，Chang chun 130062 ，China ； 2 . Guangdong Veterinary Research Institute，Guangzhou 510000 ，China ﹚ Ab stra ct ： According to the porcine reproductive and respiratory syndrome virus BJ −4plantandthemutationstrains﹙HB −1、 SY0608 、HN −HW、HuN4 ﹚，a pair of specific primers of Nsp9